公开(公告)号：CN118291409A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410527760.1

申请日：2024-04-29

Applicant: 邦泰生物工程(深圳)有限公司

Inventor： 王国红 ,  周志刚 ,  梁超群 ,  张琦 ,  温泰贤 ,  舒尚科

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P17/06 ,  C12P41/00 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明将脱氢酶SMADH2基因进行点突变，获得脱氢酶突变体SMADH2V184I、SMADH2G190A、SMADH2T241S、SMADH2V184I/G190A、SMADH2G190A/T241S、SMADH2V184I/G190A/T241S。将脱氢酶突变体基因和葡萄糖脱氢酶基因构建在pET‑28a(+)载体上，分别将质粒转到大肠杆菌感受态细胞中进行诱导表达得到突变体脱氢酶突变体SMADH2粗酶液和葡萄糖脱氢酶BsGDH粗酶液，催化底物β‑丙酮木糖苷合成R‑构型玻色因。在玻色因中间体液体（含有β‑丙酮木糖苷）中，加入葡萄糖，NADPH，然后置于35℃水浴锅中匀速搅拌，加入脱氢酶突变体SMADH2和葡萄糖脱氢酶BsGDH进行酶催化反应合成R‑构型玻色因，pH6.8‑7.5，间隔2h取样进行HPLC检测底物的消耗和产物的生产。最终结果是所有脱氢酶突变体SMADH2的催化效率均高于野生型的脱氢酶SMADH2。反应8h，脱氢酶突变体SMADH2V184I/G190A/T241S最高转化率高达98%，R‑构型玻色因产量最高为99.1g/L。

公开(公告)号：CN118291410A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410527994.6

申请日：2024-04-29

Applicant: 邦泰生物工程(深圳)有限公司 ,  中山市邦泰合盛生物科技有限公司 ,  安徽邦泰生物工程有限公司

Inventor： 梁超群 ,  周志刚 ,  王国红 ,  张琦 ,  温泰贤 ,  舒尚科

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P17/06 ,  C12P41/00

Abstract: 本发明将来源于Kluyveromyces polyspora的醇脱氢酶（KpADH）进行点突变得到KpADH的突变体KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N，将KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N突变载体热击转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中，得到醇脱氢酶突变体KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N重组工程菌。重组工程菌发酵得到KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N粗酶液，醇脱氢酶突变体KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N的酶活力为5.07 U/mg。在β‑丙酮木糖苷中，加入葡萄糖、NADPH、醇脱氢酶突变体粗酶液、BsGDH，制备高浓度(S)‑玻色因。KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N反应条件的优化，最佳反应条件为：在β‑丙酮木糖苷中，加入葡萄糖、0.6 mM NADPH、3 g/L KpADHQ136N/F161V/S237N/A269G/A318N粗酶液、3 g/L BsGDH粗酶液，温度35℃，pH 7.5。

公开(公告)号：CN118813578A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202411259522.3

申请日：2024-09-10

Applicant: 邦泰生物工程(深圳)有限公司

Inventor： 梁超群 ,  高升 ,  张琦 ,  马梦婷 ,  舒尚科 ,  刘倩敏

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/30 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种多聚磷酸激酶突变体，以解决ATP再生系统效率低的问题。多聚磷酸激酶突变体是将野生型多聚磷酸激酶的氨基酸突变为Y286Stop或者L290Stop，多聚磷酸激酶突变体比野生型多聚磷酸激酶酶活性高。多聚磷酸激酶突变体转化到大肠杆菌，获得含有多聚磷酸激酶突变体的基因工程菌。以D‑核糖、ATP和烟酰胺为底物，多聚磷酸激酶突变体、核糖激酶、磷酸核糖焦磷酸激酶、烟酰胺磷酸核糖转移酶催化生成NMN。在3小时内使NMN产量分别达到25.2 g/L和23.6 g/L，产率都超过70%，具有广泛的工业应用前景。