一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116790578A

    公开(公告)日:2023-09-22

    申请号:CN202311054482.4

    申请日:2023-08-22

    IPC分类号: C12N15/10

    摘要: 本发明公开了一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括以下步骤:对裂解液进行澄清过滤和浓缩换液,得到浓缩液;对所述浓缩液进行羟基磷灰石层析,得到超螺旋质粒洗脱液;对所述超螺旋质粒洗脱液进行终浓缩处理,即得目的质粒;所述裂解液是菌体原料经碱裂解和中和处理后所得到;所述浓缩液中含有100‑250mM NaCl;所述羟基磷灰石层析采用的洗脱液包括0.5M NaCl。本发明的生产工艺使用羟基磷灰石层析方法,在浓缩换液后,使浓缩液保持一定的氯化钠浓度,直接流穿,然后经过高浓度的氯化钠进行洗脱,即可得到较高质量的超螺旋质粒。该生产工艺可以有效提升质粒的回收率和生产效率。

    一种快速纯化慢病毒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116769736B

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202311033738.3

    申请日:2023-08-17

    IPC分类号: C12N7/02 C12R1/93

    摘要: 本发明公开了一种快速纯化慢病毒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括在经核酸酶预处理后的病毒原液中加入病毒保护剂,再依次经过澄清过滤、浓缩换液、复合层析和终浓缩,纯化得到所述慢病毒的步骤;所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩均采用中空纤维柱进行处理,并且所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩中的浓缩步骤的压力均控制在大于8Psi并不超过14Psi的范围内。该生产工艺提高了慢病毒的稳定性和回收率,使得在室温条件下,即可生产出高滴度和高回收率的慢病毒,从而为慢病毒的大规模生产奠定了基础。

    一种大规模质粒生产的发酵工艺
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116751731A

    公开(公告)日:2023-09-15

    申请号:CN202311006369.9

    申请日:2023-08-11

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/867 C12R1/19

    摘要: 本发明公开了一种大规模质粒生产的发酵工艺,涉及微生物发酵技术领域。该发酵工艺采用一种发酵培养基进行,该发酵培养基包括基础培养基和补料培养基;该基础培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠、甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、七水硫酸镁和消泡剂;该补料培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、甘油、七水硫酸镁、脯氨酸、亮氨酸和消泡剂。本发明基于现有发酵培养基开发了一种新的发酵培养基,利用该培养基进行质粒菌种发酵培养,可以满足高密度发酵的要求,提高质粒的产量,进而提高质粒生产的产能,降低生产成本。

    一种基于内参基因检测载体拷贝数的引物和探针、方法及应用

    公开(公告)号:CN118272504A

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202410692952.8

    申请日:2024-05-31

    IPC分类号: C12Q1/686 C12Q1/70 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种基于内参基因检测载体拷贝数的引物和探针、方法及应用,属于生物技术领域。引物和探针包括如SEQ ID NO:1‑2所示的内参基因36B4的引物组和SEQ ID NO:3‑5所示的目的基因MSLN的引物探针组。分别以36B4质粒和MSLN质粒为模板建立标准曲线I和II;利用引物组对待测样品中36B4基因进行PCR,获得待测样品中36B4基因的Ct值,通过标准曲线I计算待测样本的36B4基因拷贝数;利用引物探针组对待测样品中MSLN基因进行PCR,获得待测样品中MSLN基因的Ct值,通过标准曲线II计算待测样本的MSLN基因拷贝数。本发明可更精确的检测CAR‑NK细胞中整合的病毒载体拷贝数。

    一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116790578B

    公开(公告)日:2023-12-12

    申请号:CN202311054482.4

    申请日:2023-08-22

    IPC分类号: C12N15/10

    摘要: 本发明公开了一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括以下步骤:对裂解液进行澄清过滤和浓缩换液,得到浓缩液;对所述浓缩液进行羟基磷灰石层析,得到超螺旋质粒洗脱液;对所述超螺旋质粒洗脱液进行终浓缩处理,即得目的质粒;所述裂解液是菌体原料经碱裂解和中和处理后所得到;所述浓缩液中含有100‑250mM NaCl;所述羟基磷灰石层析采用的洗脱液包括0.5M NaCl。本发明的生产工艺使用羟基磷灰石层析方法,在浓缩换液后,使浓缩液保持一定的氯化钠浓度,直接流穿,然后经过高浓度的氯化钠进行洗脱,即可得到较高质量的超螺旋质粒。该生产工艺可以有效提升质粒的回收率和生产效率。

    一种大规模质粒生产的发酵工艺

    公开(公告)号:CN116751731B

    公开(公告)日:2023-11-24

    申请号:CN202311006369.9

    申请日:2023-08-11

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/867 C12R1/19

    摘要: 本发明公开了一种大规模质粒生产的发酵工艺,涉及微生物发酵技术领域。该发酵工艺采用一种发酵培养基进行,该发酵培养基包括基础培养基和补料培养基;该基础培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠、甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、七水硫酸镁和消泡剂;该补料培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、甘油、七水硫酸镁、脯氨酸、亮氨酸和消泡剂。本发明基于现有发酵培养基开发了一种新的发酵培养基,利用该培养基进行质粒菌种发酵培养,可以满足高密度发酵的要求,提高质粒的产量,进而提高质粒生产的产能,降低生产成本。