一种自然杀伤细胞外泌体的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN118109410A

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202410509093.4

    申请日:2024-04-26

    发明人: 刘红 侯国栋

    摘要: 本发明公开了一种自然杀伤细胞外泌体的制备方法及应用,属于临床医学领域。本发明通过从外周血中分离单个核细胞,经培养、扩增,得到高纯度的自然杀伤细胞,利用超滤浓缩法分离提取自然杀伤细胞中的外泌体,得到自然杀伤细胞外泌体。经实验验证,该自然杀伤细胞外泌体和人乳头瘤病毒16型假病毒同时接种于HEK293细胞,可降低20%的HPV16PP感染效率;连续给药自然杀伤细胞外泌体7天,可杀死HEK293细胞中90%以上HPV病毒。本发明公开的自然杀伤细胞外泌体具有显著杀伤HPV病毒的作用。

    一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116790578A

    公开(公告)日:2023-09-22

    申请号:CN202311054482.4

    申请日:2023-08-22

    IPC分类号: C12N15/10

    摘要: 本发明公开了一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括以下步骤:对裂解液进行澄清过滤和浓缩换液,得到浓缩液;对所述浓缩液进行羟基磷灰石层析,得到超螺旋质粒洗脱液;对所述超螺旋质粒洗脱液进行终浓缩处理,即得目的质粒;所述裂解液是菌体原料经碱裂解和中和处理后所得到;所述浓缩液中含有100‑250mM NaCl;所述羟基磷灰石层析采用的洗脱液包括0.5M NaCl。本发明的生产工艺使用羟基磷灰石层析方法,在浓缩换液后,使浓缩液保持一定的氯化钠浓度,直接流穿,然后经过高浓度的氯化钠进行洗脱,即可得到较高质量的超螺旋质粒。该生产工艺可以有效提升质粒的回收率和生产效率。

    一种小规模提高质粒产量的摇床培养方法、发酵培养基及应用

    公开(公告)号:CN118291346B

    公开(公告)日:2024-08-20

    申请号:CN202410719784.7

    申请日:2024-06-05

    IPC分类号: C12N1/20 C12N15/70 C12R1/19

    摘要: 本发明公开了一种小规模提高质粒产量的摇床培养方法、发酵培养基及应用,属于微生物发酵领域。该方法包括以下步骤:将含有目的质粒的重组工程菌接种添加磁力搅拌子的凹槽摇瓶中的发酵培养基,置于磁力搅拌器上恒温发酵培养;所述发酵培养基的组分为:10g/L胰蛋白胨、30g/L酵母粉、5g/L氯化钠和0.2mL/L消泡剂。本发明通过培养基、培养条件和培养设备等条件的优化,可以显著提高小规模摇瓶生产质粒的产量。本发明能显著提高质粒的产能,降低生产时间成本。

    一种自然杀伤细胞外泌体的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN118109410B

    公开(公告)日:2024-07-16

    申请号:CN202410509093.4

    申请日:2024-04-26

    发明人: 刘红 侯国栋

    摘要: 本发明公开了一种自然杀伤细胞外泌体的制备方法及应用,属于临床医学领域。本发明通过从外周血中分离单个核细胞,经培养、扩增,得到高纯度的自然杀伤细胞,利用超滤浓缩法分离提取自然杀伤细胞中的外泌体,得到自然杀伤细胞外泌体。经实验验证,该自然杀伤细胞外泌体和人乳头瘤病毒16型假病毒同时接种于HEK293细胞,可降低20%的HPV16PP感染效率;连续给药自然杀伤细胞外泌体7天,可杀死HEK293细胞中90%以上HPV病毒。本发明公开的自然杀伤细胞外泌体具有显著杀伤HPV病毒的作用。

    一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法

    公开(公告)号:CN117343902A

    公开(公告)日:2024-01-05

    申请号:CN202311639847.X

    申请日:2023-12-04

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明公开了一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法,属于细胞培养领域。该方法包括单个核细胞的分离、NK细胞的激活和NK细胞的扩增;所述NK激活阶段的培养基包括无血清培养基、沙培林、CD16抗体、CD137抗体、CD335(NKp46)抗体、IL‑2、IL‑15和人自体血浆;所述NK扩增阶段的培养基包括无血清培养基、IL‑2、IL‑15和人自体血浆。本发明通过对外周血来源的单个核细胞进行体外激活和扩增,可以得到大量高纯度、高杀伤活性、高细胞毒活性的CD56brightNK细胞,培养21天,NK细胞扩增倍数为800倍,CD3‑CD56+的比例大于98%,CD16+的比例大于95%,本发明能够满足临床对NK细胞的需求。

    一种快速纯化慢病毒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116769736B

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202311033738.3

    申请日:2023-08-17

    IPC分类号: C12N7/02 C12R1/93

    摘要: 本发明公开了一种快速纯化慢病毒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括在经核酸酶预处理后的病毒原液中加入病毒保护剂,再依次经过澄清过滤、浓缩换液、复合层析和终浓缩,纯化得到所述慢病毒的步骤;所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩均采用中空纤维柱进行处理,并且所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩中的浓缩步骤的压力均控制在大于8Psi并不超过14Psi的范围内。该生产工艺提高了慢病毒的稳定性和回收率,使得在室温条件下,即可生产出高滴度和高回收率的慢病毒,从而为慢病毒的大规模生产奠定了基础。