一种快速纯化慢病毒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116769736B

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202311033738.3

    申请日:2023-08-17

    IPC分类号: C12N7/02 C12R1/93

    摘要: 本发明公开了一种快速纯化慢病毒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括在经核酸酶预处理后的病毒原液中加入病毒保护剂,再依次经过澄清过滤、浓缩换液、复合层析和终浓缩,纯化得到所述慢病毒的步骤;所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩均采用中空纤维柱进行处理,并且所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩中的浓缩步骤的压力均控制在大于8Psi并不超过14Psi的范围内。该生产工艺提高了慢病毒的稳定性和回收率,使得在室温条件下,即可生产出高滴度和高回收率的慢病毒,从而为慢病毒的大规模生产奠定了基础。

    一种小规模提高质粒产量的摇床培养方法、发酵培养基及应用

    公开(公告)号:CN118291346A

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202410719784.7

    申请日:2024-06-05

    IPC分类号: C12N1/20 C12N15/70 C12R1/19

    摘要: 本发明公开了一种小规模提高质粒产量的摇床培养方法、发酵培养基及应用,属于微生物发酵领域。该方法包括以下步骤:将含有目的质粒的重组工程菌接种添加磁力搅拌子的凹槽摇瓶中的发酵培养基,置于磁力搅拌器上恒温发酵培养;所述发酵培养基的组分为:10g/L胰蛋白胨、30g/L酵母粉、5g/L氯化钠和0.2mL/L消泡剂。本发明通过培养基、培养条件和培养设备等条件的优化,可以显著提高小规模摇瓶生产质粒的产量。本发明能显著提高质粒的产能,降低生产时间成本。

    一种基于内参基因检测载体拷贝数的引物和探针、方法及应用

    公开(公告)号:CN118272504A

    公开(公告)日:2024-07-02

    申请号:CN202410692952.8

    申请日:2024-05-31

    IPC分类号: C12Q1/686 C12Q1/70 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种基于内参基因检测载体拷贝数的引物和探针、方法及应用,属于生物技术领域。引物和探针包括如SEQ ID NO:1‑2所示的内参基因36B4的引物组和SEQ ID NO:3‑5所示的目的基因MSLN的引物探针组。分别以36B4质粒和MSLN质粒为模板建立标准曲线I和II;利用引物组对待测样品中36B4基因进行PCR,获得待测样品中36B4基因的Ct值,通过标准曲线I计算待测样本的36B4基因拷贝数;利用引物探针组对待测样品中MSLN基因进行PCR,获得待测样品中MSLN基因的Ct值,通过标准曲线II计算待测样本的MSLN基因拷贝数。本发明可更精确的检测CAR‑NK细胞中整合的病毒载体拷贝数。

    一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺

    公开(公告)号:CN116790578B

    公开(公告)日:2023-12-12

    申请号:CN202311054482.4

    申请日:2023-08-22

    IPC分类号: C12N15/10

    摘要: 本发明公开了一种基于碱裂解法快速纯化质粒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括以下步骤:对裂解液进行澄清过滤和浓缩换液,得到浓缩液;对所述浓缩液进行羟基磷灰石层析,得到超螺旋质粒洗脱液;对所述超螺旋质粒洗脱液进行终浓缩处理,即得目的质粒;所述裂解液是菌体原料经碱裂解和中和处理后所得到;所述浓缩液中含有100‑250mM NaCl;所述羟基磷灰石层析采用的洗脱液包括0.5M NaCl。本发明的生产工艺使用羟基磷灰石层析方法,在浓缩换液后,使浓缩液保持一定的氯化钠浓度,直接流穿,然后经过高浓度的氯化钠进行洗脱,即可得到较高质量的超螺旋质粒。该生产工艺可以有效提升质粒的回收率和生产效率。

    一种大规模质粒生产的发酵工艺

    公开(公告)号:CN116751731B

    公开(公告)日:2023-11-24

    申请号:CN202311006369.9

    申请日:2023-08-11

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/867 C12R1/19

    摘要: 本发明公开了一种大规模质粒生产的发酵工艺,涉及微生物发酵技术领域。该发酵工艺采用一种发酵培养基进行,该发酵培养基包括基础培养基和补料培养基;该基础培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠、甘油、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、七水硫酸镁和消泡剂;该补料培养基包括胰蛋白胨、酵母粉、甘油、七水硫酸镁、脯氨酸、亮氨酸和消泡剂。本发明基于现有发酵培养基开发了一种新的发酵培养基,利用该培养基进行质粒菌种发酵培养,可以满足高密度发酵的要求,提高质粒的产量,进而提高质粒生产的产能,降低生产成本。

    一种快速纯化慢病毒的生产工艺
    10.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116769736A

    公开(公告)日:2023-09-19

    申请号:CN202311033738.3

    申请日:2023-08-17

    IPC分类号: C12N7/02 C12R1/93

    摘要: 本发明公开了一种快速纯化慢病毒的生产工艺,涉及生物技术领域。该生产工艺包括在经核酸酶预处理后的病毒原液中加入病毒保护剂,再依次经过澄清过滤、浓缩换液、复合层析和终浓缩,纯化得到所述慢病毒的步骤;所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩均采用中空纤维柱进行处理,并且所述澄清过滤、所述浓缩换液和所述终浓缩中的浓缩步骤的压力均控制在大于8Psi并不超过14Psi的范围内。该生产工艺提高了慢病毒的稳定性和回收率,使得在室温条件下,即可生产出高滴度和高回收率的慢病毒,从而为慢病毒的大规模生产奠定了基础。