本发明公开了一种检测阴道炎相关微生物的引物组合及其应用，涉及生物技术领域。该引物组合包括16S rDNA的通用引物、检测乳杆菌的特异性引物、检测惰性乳酸杆菌的特异性引物、检测加德纳菌的特异性引物、检测普雷沃氏菌的特异性引物、检测阿托波氏菌的特异性引物、18S rDNA的通用引物、检测白色念珠菌的特异性引物和检测阴道毛滴虫的特异性引物。该引物组合可以对与阴道炎相关微生物的多种靶标同时进行检测，解决了既往诊断阴道炎的主观性较大以及显微镜检查方法敏感性和特异性较低等问题。