公开(公告)号：CN110760489B

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN201911124598.4

申请日：2019-11-18

Applicant: 西南交通大学

Inventor： 周嘉裕 ,  廖海 ,  严子成 ,  廖东颖 ,  陈安琪 ,  李秋娥

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种川芎咖啡酸‑O‑甲基转移酶突变体及其用途，属于生物工程技术领域。突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；突变体的获得是基于发现318位氨基酸是影响活性的一个关键位点并用定点突变将其318位的异亮氨酸残基(I)突变成苏氨酸残基(T)；利用生物工程技术将突变体重组蛋白表达纯化分离出来。转移酶突变体的应用会明显提高作为催化剂时的咖啡酸甲酯转化效率，在酶法合成阿魏酸甲酯的方法中具有较好的应用前景。

公开(公告)号：CN110760489A

公开(公告)日：2020-02-07

申请号：CN201911124598.4

申请日：2019-11-18

Applicant: 西南交通大学

Inventor： 周嘉裕 ,  廖海 ,  严子成 ,  廖东颖 ,  陈安琪 ,  李秋娥

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种川芎咖啡酸-O-甲基转移酶突变体及其用途，属于生物工程技术领域。突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；突变体的获得是基于发现318位氨基酸是影响活性的一个关键位点并用定点突变将其318位的异亮氨酸残基(I)突变成苏氨酸残基(T)；利用生物工程技术将突变体重组蛋白表达纯化分离出来。转移酶突变体的应用会明显提高作为催化剂时的咖啡酸甲酯转化效率，在酶法合成阿魏酸甲酯的方法中具有较好的应用前景。

公开(公告)号：CN109913511B

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN201910261291.2

申请日：2019-04-02

Applicant: 西南交通大学

Inventor： 廖海 ,  严子成 ,  周嘉裕 ,  陈安琪 ,  李秋娥

IPC: C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种酶法合成阿魏酸甲酯的方法，该方法以川芎咖啡酸‑O‑甲基转移酶为催化剂，以咖啡酸甲酯和S‑腺苷甲硫氨酸为反应物，再加入缓冲液、还原剂配置成反应体系，制得阿魏酸甲酯。本发明提供的酶法合成阿魏酸甲酯的方法，以咖啡酸甲基转移酶为催化剂、以咖啡酸甲酯和S‑腺苷甲硫氨酸为反应物制备阿魏酸甲酯，生产工艺步骤少，反应条件温和，绿色环保。

公开(公告)号：CN109913511A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910261291.2

申请日：2019-04-02

Applicant: 西南交通大学

Inventor： 廖海 ,  严子成 ,  周嘉裕 ,  陈安琪 ,  李秋娥

IPC: C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种酶法合成阿魏酸甲酯的方法，该方法以川芎咖啡酸-O-甲基转移酶为催化剂，以咖啡酸甲酯和S-腺苷甲硫氨酸为反应物，再加入缓冲液、还原剂配置成反应体系，制得阿魏酸甲酯。本发明提供的酶法合成阿魏酸甲酯的方法，以咖啡酸甲基转移酶为催化剂、以咖啡酸甲酯和S-腺苷甲硫氨酸为反应物制备阿魏酸甲酯，生产工艺步骤少，反应条件温和，绿色环保。

公开(公告)号：CN110734935A

公开(公告)日：2020-01-31

申请号：CN201911078868.2

申请日：2019-11-07

Applicant: 西南交通大学

Inventor： 廖海黎 ,  周嘉裕 ,  陈安琪 ,  李秋娥 ,  张田 ,  黄新河

IPC: C12P7/42 ,  C12P7/62 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于酶法合成阿魏酸及阿魏酸甲酯方法的优化与改进，包括以下步骤：步骤1：将含有质粒LCCOMT-pET28a的大肠杆菌BL21菌株进行活化；步骤2：对步骤1得到的菌液进行扩大培养后，同时加入IPTG、咖啡酸/咖啡酸甲酯进行共发酵；步骤3：将共发酵后的发酵液离心，用乙酸乙酯萃取后即可得到阿魏酸/阿魏酸甲酯；本发明采用基因工程酶（LCCOMT）基因工程菌的共发酵制备阿魏酸或阿魏酸甲酯，工艺简单、成本低、过程可控且环保。