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公开(公告)号：CN118497204A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410946361.9
申请日：2024-07-16
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种质粒CRISPR‑pCas9n及基因编辑的方法与应用。本发明基于由质粒pCas9n和质粒pTarget组成的CRISPR‑pCas9n基因编辑系统，采用定点突变的方法，将所述质粒pCas9中Cas9n的活性位点Asp10或His840突变为Ala。本发明提供的方法用于细菌的单/双或三基因的定向敲除时，均表现出较好的敲除率，远高于传统的同源重组的方法和CRISPR‑Cas9基因编辑系统，且不受目的基因的长度限制。
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公开(公告)号：CN117089532A
公开(公告)日：2023-11-21
申请号：CN202311274640.7
申请日：2023-09-28
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种漆酶基因的异源表达及其表达产物。本发明将编码漆酶的基因与载体质粒连接，形成重组载体质粒，将重组载体质粒转染至宿主菌进行异源表达，获得漆酶。编码所述漆酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，漆酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明所述漆酶的最适反应pH值为1.0，最适反应温度为50℃；对底物2，2‑联氮‑二（3‑乙基‑苯并噻唑‑6‑磺酸）二铵盐的最大反应速率为0.05mM min‑1；Km值为0.36mM。
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公开(公告)号：CN117025651B
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202311287810.5
申请日：2023-10-08
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/113 , C12N15/53 , C12N15/11
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种欧文氏菌中漆酶基因敲除的方法。本发明构建了由质粒pCas、带有靶向目的基因的sgRNA和待敲除片段上下游同源臂的重组质粒pTarget组成的CRISPR‑Cas9基因编辑系统，提供了在IPTG的诱导下利用该基因敲除系统构建基因敲除突变菌株的方法，定向敲除QL‑Z3菌株的漆酶ELAC_205基因。本发明提供的由CRISPR‑Cas9基因编辑系统介导的基因敲除方法，其敲除率达到了82.22%，远高于传统的同源重组的方法。
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公开(公告)号：CN117025651A
公开(公告)日：2023-11-10
申请号：CN202311287810.5
申请日：2023-10-08
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/113 , C12N15/53 , C12N15/11
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种欧文氏菌中漆酶基因敲除的方法。本发明构建了由质粒pCas、带有靶向目的基因的sgRNA和待敲除片段上下游同源臂的重组质粒pTarget组成的CRISPR‑Cas9基因编辑系统，提供了在IPTG的诱导下利用该基因敲除系统构建基因敲除突变菌株的方法，定向敲除QL‑Z3菌株的漆酶ELAC_205基因。本发明提供的由CRISPR‑Cas9基因编辑系统介导的基因敲除方法，其敲除率达到了82.22%，远高于传统的同源重组的方法。
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公开(公告)号：CN116254209B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310542732.2
申请日：2023-05-15
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
摘要： 本发明公开了一种提高木质素降解菌降解性能的方法，菌株Erwinia sp.QL‑Z3对木质素的降解率从优化前的14.23%优化至25.01%；在培养基初始pH值为8，氮源为NH4NO3，木质素的添加量为3g/L的条件下，LiP酶活力可优化至371.00U/L，是优化前的3.53倍；在培养基初始pH值为9.5，氮源为NH4NO3，木质素浓度为2.5g/L，MnP、Lac酶活力分别可优化至839.50U/L、219.00U/L，是优化前的3.18、2.84倍，优化结果显著。
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公开(公告)号：CN116254209A
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202310542732.2
申请日：2023-05-15
申请人： 西北农林科技大学深圳研究院
摘要： 本发明公开了一种提高木质素降解菌降解性能的方法，菌株Erwinia sp.QL‑Z3对木质素的降解率从优化前的14.23%优化至25.01%；在培养基初始pH值为8，氮源为NH4NO3，木质素的添加量为3g/L的条件下，LiP酶活力可优化至371.00U/L，是优化前的3.53倍；在培养基初始pH值为9.5，氮源为NH4NO3，木质素浓度为2.5g/L，MnP、Lac酶活力分别可优化至839.50U/L、219.00U/L，是优化前的3.18、2.84倍，优化结果显著。
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