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公开(公告)号：CN113670845B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202110717195.1
申请日：2021-06-28
申请人： 湖南省中医药研究院
IPC分类号： G01N21/33
摘要： 本发明公开了快速检测益生菌活性试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括PBS缓冲液、黄精多糖提取液、MTT染色液、二甲基亚砜。具体的检测方法为：S1：取益生菌的菌液1‑5ml于无菌的离心管中，按体积比1:0.5‑1加入黄精多糖提取液，离心后，弃去上清液；S2：向S1的菌液中加入4‑5ml的PBS缓冲液，重悬菌体沉淀，涡旋震荡至无菌块为止；S3：向S2的混合液中加入0.5‑2ml的MTT染色液并混合均匀；S4：将S3的混合液置于避光的37℃培养箱反应0.5‑4h，然后离心4‑6min，弃去上清液；S5：向S4离心后的反应产物中加入1‑5ml的二甲基亚砜，涡旋震荡至无菌块，避光室温放置离心并弃沉淀；S6：将所述S5中的上清液放于紫外分光光度计中测得其吸光值。本发明提高了测定的准确性，且检测速度快。
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公开(公告)号：CN113621535A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110792603.X
申请日：2021-07-14
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了提高益生菌冻干粉存活率的复合保护剂及其制备方法，该复合保护剂包括：脱脂奶粉1‑10份，海藻糖1‑10份，蔗糖1‑10份，葡萄糖1‑10份，明胶1‑10份，黄精多糖1‑10份；益生菌冻干粉制备的方法步骤如下：S1：将益生菌菌种接入微生物培养基中，将培养基置于摇床中发酵培养活化，并收集活化后的微生物悬液；S2：将S1中的微生物悬液离心后弃去上清液，收集菌泥；S3：在菌泥中加入复合保护剂，并混合均匀的益生菌悬液；S4：将S3中的微生物悬液预冻后进行真空冷冻得益生菌冻干粉。本发明在提高益生菌冻干粉存活率的同时，利用药食两用资源黄精的补益作用，增加益生菌冻干粉产品的滋补功效。
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公开(公告)号：CN116286887A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310204500.6
申请日：2023-03-06
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了茯苓酸合成的关键基因及应用，该茯苓酸合成的关键基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；关键基因包括PcCPR和CYP5035，PcCPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，CYP5035的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；PcCPR和CYP5035均在pESC‑Trp载体质粒上；PcCPR和CYP5035均位于半乳糖启动子之后；PcCPR位于GAL10启动子之后，CYP5035位于GAL1启动子之后，GAL10启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，GAL1启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。本发明通过大量前期筛选和实验，找到了以羊毛甾醇为底物，进行C‑16羟基化和C‑20甲基羧基化的茯苓酸合成关键酶基因CYP5035；本发明有望构建完整的茯苓酸生物合成通路，阐释茯苓活性物质合成的内在品质属性，也可为茯苓酸生物合成细胞工厂研究应用提供数据支持，促进中药资源的创新发展。
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公开(公告)号：CN113670845A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202110717195.1
申请日：2021-06-28
申请人： 湖南省中医药研究院
IPC分类号： G01N21/33
摘要： 本发明公开了快速检测益生菌活性试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括PBS缓冲液、黄精多糖提取液、MTT染色液、二甲基亚砜。具体的检测方法为：S1：取益生菌的菌液1‑5ml于无菌的离心管中，按体积比1:0.5‑1加入黄精多糖提取液，离心后，弃去上清液；S2：向S1的菌液中加入4‑5ml的PBS缓冲液，重悬菌体沉淀，涡旋震荡至无菌块为止；S3：向S2的混合液中加入0.5‑2ml的MTT染色液并混合均匀；S4：将S3的混合液置于避光的37℃培养箱反应0.5‑4h，然后离心4‑6min，弃去上清液；S5：向S4离心后的反应产物中加入1‑5ml的二甲基亚砜，涡旋震荡至无菌块，避光室温放置离心并弃沉淀；S6：将所述S5中的上清液放于紫外分光光度计中测得其吸光值。本发明提高了测定的准确性，且检测速度快。
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公开(公告)号：CN115820920A
公开(公告)日：2023-03-21
申请号：CN202211623483.1
申请日：2022-12-16
申请人： 湖南省中医药研究院
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
摘要： 本发明适用于分子标记技术领域，提供了一种用于鉴定多花黄精的分子标记，其特征在于，包括分子标记trnT‑GGU+ccsA和/或ndhG～ndhA；所述分子标记trnT‑GGU+ccsA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1；所述分子标记ndhG～ndhA的核苷酸序列如SEQ ID NO：2。本发明还提供了一种用于鉴定多花黄精的引物组、试剂盒以及方法。本发明可以从分子水平上快速、有效、准确的对药用黄精‑多花黄精进行鉴定，鉴定过程快速，耗时短，方法简单，能够科学鉴定多花黄精的真伪，确保临床用药的安全性及有效性，确保中药黄精的质量。
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公开(公告)号：CN114480469A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210139672.5
申请日：2022-02-16
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了装载茯苓内源序列的基因编辑载体、编辑系统及应用，所述基因编辑载体包括用于启动sgRNA的编码DNA转录的茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子、内源终止子PcTer序列、内源自我复制序列PcOri和内源间隔序列PcSse；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子包括PcU6‑1、PcU6‑2、PcU6‑3中的任意一种或几种；所述基因组编辑载体还包括茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框；茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框中，在sgRNA scaffold序列后设计茯苓内源终止子PcTer序列；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框可由多个串联构成，相邻表达框之间加入茯苓内源间隔序列PcSse。本发明的基因编辑系统能够用于对茯苓细胞进行转化和基因编辑。
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公开(公告)号：CN113621535B
公开(公告)日：2024-02-13
申请号：CN202110792603.X
申请日：2021-07-14
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了提高益生菌冻干粉存活率的复合保护剂及其制备方法，该复合保护剂包括：脱脂奶粉1‑10份，海藻糖1‑10份，蔗糖1‑10份，葡萄糖1‑10份，明胶1‑10份，黄精多糖1‑10份；益生菌冻干粉制备的方法步骤如下：S1：将益生菌菌种接入微生物培养基中，将培养基置于摇床中发酵培养活化，并收集活化后的微生物悬液；S2：将S1中的微生物悬液离心后弃去上清液，收集菌泥；S3：在菌泥中加入复合保护剂，并混合均匀的益生菌悬液；S4：将S3中的微生物悬液预冻后进行真空冷冻得益生菌冻干粉。本发明在提高益生菌冻干粉存活率的同时，利用药食两用资源黄精的补益作用，增加益生菌冻干粉产品的滋补功
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公开(公告)号：CN114480469B
公开(公告)日：2023-10-31
申请号：CN202210139672.5
申请日：2022-02-16
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了装载茯苓内源序列的基因编辑载体、编辑系统及应用，所述基因编辑载体包括用于启动sgRNA的编码DNA转录的茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子、内源终止子PcTer序列、内源自我复制序列PcOri和内源间隔序列PcSse；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子包括PcU6‑1、PcU6‑2、PcU6‑3中的任意一种或几种；所述基因组编辑载体还包括茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框；茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框中，在sgRNA scaffold序列后设计茯苓内源终止子PcTer序列；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框可由多个串联构成，相邻表达框之间加入茯苓内源间隔序列PcSse。本发明的基因编辑系统能够用于对茯苓细胞进行转化和基因编辑。
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