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公开(公告)号：CN116286887A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310204500.6
申请日：2023-03-06
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了茯苓酸合成的关键基因及应用，该茯苓酸合成的关键基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；关键基因包括PcCPR和CYP5035，PcCPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，CYP5035的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；PcCPR和CYP5035均在pESC‑Trp载体质粒上；PcCPR和CYP5035均位于半乳糖启动子之后；PcCPR位于GAL10启动子之后，CYP5035位于GAL1启动子之后，GAL10启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，GAL1启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。本发明通过大量前期筛选和实验，找到了以羊毛甾醇为底物，进行C‑16羟基化和C‑20甲基羧基化的茯苓酸合成关键酶基因CYP5035；本发明有望构建完整的茯苓酸生物合成通路，阐释茯苓活性物质合成的内在品质属性，也可为茯苓酸生物合成细胞工厂研究应用提供数据支持，促进中药资源的创新发展。
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公开(公告)号：CN114480469B
公开(公告)日：2023-10-31
申请号：CN202210139672.5
申请日：2022-02-16
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了装载茯苓内源序列的基因编辑载体、编辑系统及应用，所述基因编辑载体包括用于启动sgRNA的编码DNA转录的茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子、内源终止子PcTer序列、内源自我复制序列PcOri和内源间隔序列PcSse；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子包括PcU6‑1、PcU6‑2、PcU6‑3中的任意一种或几种；所述基因组编辑载体还包括茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框；茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框中，在sgRNA scaffold序列后设计茯苓内源终止子PcTer序列；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框可由多个串联构成，相邻表达框之间加入茯苓内源间隔序列PcSse。本发明的基因编辑系统能够用于对茯苓细胞进行转化和基因编辑。
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公开(公告)号：CN114480469A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210139672.5
申请日：2022-02-16
申请人： 湖南省中医药研究院
摘要： 本发明公开了装载茯苓内源序列的基因编辑载体、编辑系统及应用，所述基因编辑载体包括用于启动sgRNA的编码DNA转录的茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子、内源终止子PcTer序列、内源自我复制序列PcOri和内源间隔序列PcSse；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子包括PcU6‑1、PcU6‑2、PcU6‑3中的任意一种或几种；所述基因组编辑载体还包括茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框；茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框中，在sgRNA scaffold序列后设计茯苓内源终止子PcTer序列；所述茯苓内源RNA聚合酶III型U6型启动子调控的sgRNA转录的表达框可由多个串联构成，相邻表达框之间加入茯苓内源间隔序列PcSse。本发明的基因编辑系统能够用于对茯苓细胞进行转化和基因编辑。
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