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公开(公告)号：CN116218826B
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202211357478.0
申请日：2022-11-01
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
Abstract: 本发明提供了一种肝素酶突变体H2‑15及其工程菌株和应用，属于蛋白突变技术领域。本发明提供的肝素酶突变体H2‑15，是在野生型肝素酶氨基酸序列SEQ ID NO:1的基础上进行了以下突变：P10R、V45A、C113S、L135P、L160P、R166C和R218G。本发明对来源于拉乌尔菌属(Raoultellasp.)的肝素酶基因采用CepPCR与MegawhopPCR结合的易错PCR技术进行随机突变，高通量筛选获得高酶活的肝素酶突变体。实验结果表明，重组表达的肝素酶突变体菌株的酶活为4000U/L以上，比野生型肝素酶酶活提高了112.1％以上，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN115851669B
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202211357706.4
申请日：2022-11-01
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
IPC: C12N9/24 , C12N15/56 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N11/10 , C12N11/04 , C12P19/14 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种肝素酶突变体H1‑5及其编码基因、突变菌株和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的肝素酶突变体H1‑5，是在野生型肝素酶氨基酸序列SEQ ID NO:1的基础上进行了以下突变：S104C、A122G、K134M和L160P。本发明对来源于拉乌尔菌属(Raoultella sp.)的肝素酶基因基于易错PCR技术进行随机突变，高通量筛选获得高酶活的肝素酶突变体。实验结果表明，重组表达的肝素酶突变体菌株的酶活为3718U/L以上，而野生型菌株酶活仅为1886U/L，本发明提供的肝素酶突变体比野生型肝素酶酶活提高了97.1％以上，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN115927277A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211357682.2
申请日：2022-11-01
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
Abstract: 本发明提供了一种肝素酶突变体H1‑6及其工程菌株和应用，属于蛋白突变技术领域。本发明提供的肝素酶突变体H1‑6，是在野生型肝素酶氨基酸序列SEQ ID NO:1的基础上进行了以下突变：P10R、V45A、C113S、L135P、L160P、R166C和R218G。本发明对来源于拉乌尔菌属(Raoultellasp.)的肝素酶基因采用CepPCR与MegawhopPCR结合的易错PCR技术进行随机突变，高通量筛选获得高酶活的肝素酶突变体。实验结果表明，重组表达的肝素酶突变体菌株的酶活为3726U/L以上，比野生型肝素酶酶活提高了97.6％以上，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN108823139A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810845751.1
申请日：2018-07-27
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明提供了一株生产肝素酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli BLR(DE3)-pBENT-H1，属于基因工程菌的构建的技术领域，保藏编号为CGMCC No.15819。本发明提供的生产肝素酶的大肠埃希氏菌能够生产肝素酶，肝素酶的酶活为2540U/L，将得到的肝素酶酶解肝素，得到的超低分子量肝素的重均分子量为1419Da，低分子量肝素的Anti-FXa/Anti-FIIa效价比值为28.4。
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公开(公告)号：CN105219806A
公开(公告)日：2016-01-06
申请号：CN201510595543.7
申请日：2015-09-17
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
Abstract: 本发明公开了一种酵母菌转化异丁香酚生产香兰素的方法，包括：S1、构建用于生产异丁香酚单加氧酶的酵母菌；S2、将构建的所述酵母菌接种至YPD液体培养基中振荡培养；S3、离心收集菌体，生理盐水洗涤，转入MGY液体培养基中振荡培养；S4、离心收集菌体，生理盐水洗涤，转入MM液体培养基中使OD600>6，振荡培养3-5天；每天补加甲醇，并用氨水调节pH，得到发酵液；选择性地将所述发酵液离心以收集上清液；S5、按异丁香酚：所述上清液或所述发酵液：缓冲液＝0.1-0.6g：9-18mL：9-18mL加入反应容器中，在20-30℃下振摇转化12-48h，得到香兰素。本发明实现采用酵母菌工业化生产香兰素，适用于食品领域等，满足需求，安全。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116396882A
公开(公告)日：2023-07-07
申请号：CN202210881764.0
申请日：2022-07-26
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
Abstract: 本发明提供了一种NRK生产菌、生产NRK的方法以及应用，属于工程菌技术领域。本发明从污泥中筛选出一株新型NRK生产菌NRK5‑1(Enterobacterkobei2020T51)，其粗酶液可催化生成142.5μmol/LNMN。对筛选出的菌株Enterobacterkobei2020T51进行发酵条件优化构建高效表达体系，最佳发酵条件：1％葡萄糖、3％多价蛋白胨、0.75％KH2PO4和0.03％MgSO4·7H2O，初始pH7.0的发酵培养基，40℃、200rpm恒温摇床培养16h进行发酵，适宜该菌表达NRK且酶活高，采用最佳发酵条件所得的粗酶液进行酶转化反应，NMN产量达332.23μmol/L，底物转化率为33.22％，为优化前的2.3倍。
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公开(公告)号：CN113881604B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202111324803.9
申请日：2021-11-10
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青 , 穆罕默德·沙希德·里亚兹·拉霍卡 , 曾瑛 , 邹国珑 , 张龙
IPC: C12N1/20 , C12P19/04 , C08B37/00 , A61K31/715 , A61P37/04 , A23L33/125 , C12R1/25
Abstract: 本发明涉及一株植物乳杆菌(Lactiplantibacillus Plantarum)MM89及其多糖和应用，属于微生物技术领域。本发明提供了一株植物乳杆菌(Lactiplantibacillus Plantarum)MM89，所述植物乳杆菌MM89的保藏编号为CGMCCNo.22641。本发明所述植物乳杆菌MM89含有并且能够用于生产具有免疫刺激活性和免疫调节活性的胞外多糖。
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公开(公告)号：CN111218466A
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN201911165968.9
申请日：2019-11-25
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明提供了一种表达肝素酶的融合基因MBP-H1及其重组质粒和应用，涉及肝素酶生产技术领域。本发明所述融合基因MBP-H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，然后利用所述融合基因MBP-H1构建pET-28a-MBP-H1融合蛋白重组质粒，最后对pET-28a-MBP-H1进行初步诱导表达条件优化，确定其最优诱导表达条件为在37℃，200rpm条件下培养至菌液OD600为0.7左右时，加入IPTG(100mM)至终浓度为0.1mM，30℃，200rpm诱导9h，肝素酶酶活最高可达4512U/L。
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公开(公告)号：CN104031873B
公开(公告)日：2018-02-23
申请号：CN201410204528.0
申请日：2014-05-14
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明公开了一种用于生产异丁香酚单加氧酶的大肠埃希氏菌及构建方法和应用，该大肠埃希氏菌命名为BL21(DE3)IEM‑PP，保藏编号为CGMCC No.8918。构建方法是利用PCR技术，以土壤的全基因组DNA为模板，在PCR引物作用下扩增得到长度为1438bp的片段，经切胶回收并纯化处理后同T载体pET21(a)连接得到克隆载体重组质粒PET21(a)‑IEM的重组菌BL21(DE3)IEM‑PP，可以应用该重组菌生物转化异丁香酚生产香草醛。
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公开(公告)号：CN106754802A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710035143.X
申请日：2017-01-17
Applicant: 深圳大学
Inventor： 赵丽青
CPC classification number: C12N9/0006 , C12P7/24 , C12Y101/01319
Abstract: 本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体及其应用，异丁香酚单加氧酶突变体包括SEQ 2所示的氨基酸序列，其具有选自第120位、第121位、第281位、第298位和第470位中的至少一个突变。本发明通过对异丁香酚单加氧酶基因进行定点突变，以获得具高催化活性的异丁香酚单加氧酶突变体。该突变体能以异丁香酚为底物，高效率催化生成香草醛；以异丁香酚为底物其具有比亲本高出至少117％的异丁香酚单加氧酶催化活性。
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