公开(公告)号：CN118086163A

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202410348884.3

申请日：2024-03-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  陆瑞 ,  赵明利

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12P17/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种观蓝染料的生物合成方法，属于微生物代谢工程技术领域。本发明构建的重组大肠杆菌是以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，将观蓝合成酶基因bpsA和4′‑磷酸酯基转移酶基因sfp2转入大肠杆菌中，并添加底物谷氨酰胺发酵合成观蓝；或再过表达谷氨酰胺合成酶基因glnA，并添加底物谷氨酸发酵合成观蓝。当添加1.46g/L谷氨酰胺时，重组菌EL1摇瓶发酵的观蓝产量可以达到6.009g/L；当添加1.46g/L谷氨酸时，重组菌EL4摇瓶发酵的观蓝产量最高可达5.241g/L，为生物合成法生产观蓝提供了思路。

公开(公告)号：CN116536232A

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202310372381.5

申请日：2023-04-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  赵明利 ,  李泽宇 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  A23L33/125 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12P19/26 ,  A61K35/74 ,  A61K31/702 ,  A61P31/12 ,  A61P37/02 ,  A61P1/00 ,  A61P31/00 ,  A61P43/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明在大肠杆菌基因组上整合尿苷二磷酸半乳糖‑4‑差向异构酶编码基因galE，在基因组IS186多拷贝基因座上插入β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶编码基因lgtA，游离表达β‑1,3‑半乳糖基转移酶编码基因wbgO使底物乳糖转化为乳酰‑N‑四糖。发现鸟苷二磷酸‑岩藻糖的从头合成途径利于乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的生产。本发明筛选到既能够提高乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ的产量，又能避免副产物2′‑岩藻糖基乳糖的生成的α1,2‑岩藻糖基转移酶WbsJ。本发明提供的重组大肠杆菌摇瓶发酵产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ达2.53g/L，5L发酵罐产量达30.47g/L，为进一步工业化生产乳酰‑N‑岩藻糖基五糖Ⅰ奠定了基础。

公开(公告)号：CN116555147A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202310598341.2

申请日：2023-05-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  赵明利 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/60 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，通过敲除基因nanA，基因nanT，基因nanK和基因nagB，游离表达外源基因neuC和基因neuB，并过表达UDP‑GlcNAc合成途径基因glmM，glmU和GlmS突变体基因glmS*获得的一种高产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌。在摇瓶发酵实验过程中，N‑乙酰神经氨酸的产量可以达到7.02g/L。分批补料条件下，在5L发酵罐中N‑乙酰神经氨酸的产量达到46.92g/L，产率达到0.82g/L/h和1.05g/gDCW，具备工业化应用的潜力。

公开(公告)号：CN119265095A

公开(公告)日：2025-01-07

申请号：CN202411427756.4

申请日：2024-10-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱韵琪 ,  赵明利 ,  朱莺莺

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种以葡萄糖和木糖合成2′‑岩藻糖基乳糖的基因工程菌的构建及应用，属于微生物基因工程领域和生物合成领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，通过重构葡萄糖转运途径、敲除竞争旁路、消除副产物途径、上调从头合成途径关键酶、强化木糖利用及过表达高效α1,2‑岩藻糖基转移酶等策略提升工程菌的产能，以葡萄糖和木糖为底物实现乳糖和2′‑岩藻糖基乳糖的高效合成。在摇瓶发酵实验过程中，在无外源乳糖添加的条件下，2′‑岩藻糖基乳糖的产量可以达到6.53g/L。分批补料条件下，在5L发酵罐中2′‑岩藻糖基乳糖的产量达到27.53g/L，具备工业化生产潜力。

公开(公告)号：CN118325802A

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202410412713.2

申请日：2024-04-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  魏强 ,  赵明利

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P1/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种用于合成黑色素的重组大肠杆菌的构建方法及其应用，属于基因工程领域。本发明以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，通过敲除酪氨酸合成的相关竞争途径基因pheA、trpR和pykA并过表达酪氨酸合成相关内源基因aroG、tyrA和tyrB促进前体酪氨酸的合成。通过过表达不同来源的酪氨酸酶操纵子基因melC1和melC2促进黑色素合成，获得的过表达Streptomyces castaneoglobisporus来源的melC基因的重组大肠杆菌具有最优的黑色素生产能力，以葡萄糖为碳源进行摇瓶培养后黑色素产量达到503mg/L。

公开(公告)号：CN118325801A

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202410412709.6

申请日：2024-04-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  魏强 ,  赵明利

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P1/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了以酪氨酸为底物发酵制备黑色素的重组菌及其应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，敲除基因pheA、基因trpR和基因pykA，分别过表达Streptomyces antibioticus或Streptomyces castaneoglobisporus两种来源的酪氨酸操纵子基因melC1和melC2，获得可合成黑色素的重组大肠杆菌。分别用含有酪氨酸的LB、R/2、MR和M9培养基发酵培养产黑色素，表达Streptomyces antibioticus来源melC的工程菌在M9培养基中可生产635mg/L黑色素。

公开(公告)号：CN118064344A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410348886.2

申请日：2024-03-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  陆瑞 ,  赵明利

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12P17/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产观蓝的重组大肠杆菌及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明构建的重组大肠杆菌是以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，表达了观蓝合成酶基因bpsA、4′‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因sfp2、谷氨酰胺合成酶基因glnA、α‑酮戊二酸脱氢酶抑制酶基因odhI和谷氨酸脱氢酶基因gdh，以及来自Streptomyces chromofuscus的辅助蛋白基因Sc‑indB。本发明构建的重组大肠杆菌经摇瓶发酵培养48h后，观蓝的产量可以达到14.98g/L，具备工业化应用的潜力。