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公开(公告)号：CN104894047B
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201510294626.2
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 基于D‑丙氨酸缺陷型筛选标记的表达D‑阿洛酮糖 3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以枯草芽孢杆菌1A751为出发菌株，敲除其染色体上D‑丙氨酸消旋酶基因(dal)得到D‑丙氨酸缺陷型的1A751(dal‑)；将梭状芽胞杆菌ATCC 35704的DPE酶基因作亲本，在其上游融合P43启动子构建成P43‑DPE，将其构建至质粒pUB110(NCBI‑Gene ID:9507338)中得到pUB‑P43‑DPE，将pUB‑P43‑DPE上的抗生素抗性基因Kan和Blm用dal替代，构建成pUB‑P43‑DPE‑dal；再转化进1A751(dal‑)中，得重组枯草芽孢杆菌1A751‑pUB‑P43‑DPE‑dal，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.001，保藏编号CCTCC NO:M 2015257。其发酵液总酶活达16U/mL，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN117467646A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202311394390.0
申请日：2023-10-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种分泌表达环糊精水解酶的方法，属于生物工程技术领域。通过向培养基中添加终浓度为5mM锰离子，使得重组枯草芽孢杆菌能够高效胞外分泌环糊精水解酶，总酶活力最高可达4.86U/mL，胞外酶活最高占比可达63.75％。相较于不添加锰离子，胞外环糊精水解酶占比提升了54.35％。本发明的方法能够使得重组枯草芽孢杆菌高效胞外分泌环糊精水解酶，且无需添加抗生素，没有内毒素污染的威胁，安全可靠，本发明所得到的环糊精水解酶，能够以β‑环糊精为底物，在温和的条件下通过生物转化制备单一DP的非还原性葡萄糖低聚糖，工艺简单，环境友好，该重组菌在化学、食品和制药领域中具有重要的应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104962508A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510294606.5
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 基于毒蛋白MazF反向筛选的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。利用载体pDGREF将毒蛋白MazF基因和抗生素抗性基因spc整合至B.subtilis 1A751染色体上，得到1A751/REF；以pDGIEF为出发载体，将梭状芽胞杆菌ATCC 35704的DPE酶基因和启动子P43构建至淀粉酶同源臂之间，得到整合载体pDGI-P43-DPE；将pDGI-P43-DPE转化至1A751/REF感受态中，在淀粉酶同源臂作用下，P43-DPE酶基因整合至1A751/REF染色体上毒蛋白MazF的位置，得到一株食品级安全的产D-阿洛酮糖3-差向异构酶重组枯草芽孢杆菌1A751-DPE，命名为枯草芽孢杆菌SK38.003，保藏号CCTCC NO: M 2015259。发酵液总酶活达到6U/mL，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN119242466A
公开(公告)日：2025-01-03
申请号：CN202411332195.X
申请日：2024-09-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产β‑果糖呋喃苷酶的重组毕赤酵母菌株及其制备方法和应用。选择毕赤酵母X33菌株并利用GAP启动子驱动和α‑factor信号肽分泌表达fopA基因，同时利用AOX启动子驱动表达分子伴侣PDI，产生的β‑果糖呋喃苷酶位于发酵上清液中，经过简单的纯化步骤即可得到β‑果糖呋喃苷酶目标蛋白，将其作用于蔗糖生产蔗果三糖，具有较好的应用价值。本发明阳性克隆摇瓶发酵72h，测定发酵上清液催化蔗糖生成蔗果三糖的酶活为694.83U/mL，产物中蔗果三糖的占比最高，为45.5％，低聚果糖占总糖比例为63.84％。
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公开(公告)号：CN104894047A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510294626.2
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 基于D-丙氨酸缺陷型筛选标记的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以枯草芽孢杆菌1A751为出发菌株，敲除其染色体上D-丙氨酸消旋酶基因(dal)得到D-丙氨酸缺陷型的1A751(dal-)；将梭状芽胞杆菌ATCC？35704？的DPE酶基因作亲本，在其上游融合P43启动子构建成P43-DPE，将其构建至质粒pUB110？(NCBI-Gene？ID:9507338)中得到pUB-P43-DPE，将pUB-P43-DPE上的抗生素抗性基因Kan和Blm用dal替代，构建成pUB-P43-DPE-dal；再转化进1A751(dal-)中，得重组枯草芽孢杆菌1A751-pUB-P43-DPE-dal，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）SK38.001，保藏编号CCTCC？NO:？M2015257。其发酵液总酶活达16U/mL，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN118995691A
公开(公告)日：2024-11-22
申请号：CN202411228458.2
申请日：2024-09-03
Applicant: 江南大学 , 河南益恒源生物科技有限公司
IPC: C12N11/18 , C12N11/14 , C12N9/90 , C12N9/92 , C12N9/10 , C12N9/16 , C12P19/02 , C12P19/24 , C12P19/18
Abstract: 本发明公开了一种固定化酶制备方法，固定化酶及其在D‑塔格糖制备中的应用，属于酶工程技术领域。以磁性硅藻土为载体，通过共价结合法，对αGP、PGM、PGI、GatZ和PGP 5种酶进行共固定化，催化麦芽糊精生产D‑塔格糖。本发明采用的磁性硅藻土具有较高的孔隙度和优良的磁响应性能。制备得到的磁性固定化酶不仅酶活高，而且重复使用8批次后，活性仍保留到原始活性的71.3％左右。因此，本发明所得共固定化酶具有重要的工业应用价值和科学研究价值。
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公开(公告)号：CN104946577A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510294696.8
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 基于Cre/lox系统的无抗性基因染色体整合的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以整合载体pDGIEF为出发载体，删除原有的壮观霉素(spc)抗生素抗性基因，引入lox71-spc-lox66新的抗生素抗性基因片段，得质粒pDGI-7S6；将ATCC 35704的DPE酶基因，在其上游融合P43启动子构建P43-DPE，将其构建至pDGI-7S6中得pDGI-7S6-P43-DPE；再转化1A751感受态，在淀粉酶同源臂作用下，P43-DPE和lox71-spc-lox66整合至1A751染色体上；利用Cre/lox系统将spc抗性基因敲除，得一株食品级安全的产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的1A751/lox-DPE，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.002，保藏编号：CCTCC NO:M 2015258。发酵液总酶活达到6U/mL，具有重要的工业应用价值。
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