公开(公告)号：CN108410845B

公开(公告)日：2020-09-04

申请号：CN201810311758.5

申请日：2018-04-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 许菲 ,  杨海泉 ,  陈媛 ,  卢潇 ,  王浩坤 ,  王拂祥 ,  代瑶

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的D,D‑羧肽酶DacA突变体及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明公开了由大肠杆菌(Escherichia coli)BL21来源的D,D‑羧肽酶DacA为母本，基于酶结构解析确定关键位点及突变方式，经分子生物学技术进行定点突变而获得催化效率提高的DacA突变体。在此改造条件下，E.coli D,D‑羧肽酶DacA的突变体K113G催化效率常数kcat值提高最多，由6543.4s‑1提高至9428.1s‑1。利用此策略可以显著提高D,D‑羧肽酶DacA的催化效率，为其在代谢改造E.coli提高其胞外分泌水平等方面的应用提供了基础。此策略对其它酶的性质改造具有重要的指导意义。

公开(公告)号：CN108410845A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810311758.5

申请日：2018-04-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 许菲 ,  杨海泉 ,  陈媛 ,  卢潇 ,  王浩坤 ,  王拂祥 ,  代瑶

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的D,D-羧肽酶DacA突变体及其制备方法，属于遗传工程和酶工程领域。本发明公开了由大肠杆菌(Escherichia coli)BL21来源的D,D-羧肽酶DacA为母本，基于酶结构解析确定关键位点及突变方式，经分子生物学技术进行定点突变而获得催化效率提高的DacA突变体。在此改造条件下，E.coli D,D-羧肽酶DacA的突变体K113G催化效率常数kcat值提高最多，由6543.4s-1提高至9428.1s-1。利用此策略可以显著提高D,D-羧肽酶DacA的催化效率，为其在代谢改造E.coli提高其胞外分泌水平等方面的应用提供了基础。此策略对其它酶的性质改造具有重要的指导意义。