公开(公告)号：CN110628800A

公开(公告)日：2019-12-31

申请号：CN201910835957.0

申请日：2019-09-05

Applicant: 武汉科技大学

Inventor： 杨忠华 ,  罗伟 ,  杜慧君 ,  王天赐 ,  侯亚利

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12P7/22 ,  C12P7/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于不对称合成技术领域，尤其涉及一种手性醇高效生产重组菌的构建方法及其在手性醇合成中的应用。技术方案包括：在大肠杆菌中引入来源于枯草芽孢杆菌168的yueD基因表达羰基还原酶BsCR；利用pET28a-yfjB过表达NAD激酶提高胞内内源性NADP+的含量提高辅酶总供应量，同时引入来源于枯草芽孢杆菌168的NADP+依赖型甘油醛-3-磷酸脱氢酶改造大肠杆菌EMP途径并提高NADPH再生效率。在两种技术手段的共同作用下，胞内NADPH含量提高到了原来的2.34倍。该生物催化剂用于S-苯乙醇的合成，结果表明产率提高了3.78倍。并在对一系列手性醇的合成中表现出优秀的性能。

公开(公告)号：CN105567621B

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201610075742.X

申请日：2016-02-03

Applicant: 武汉科技大学

Inventor： 杨忠华 ,  邓新星 ,  罗伟 ,  阮涛 ,  侯亚利 ,  周卫 ,  龚志伟 ,  黄皓

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12P7/02 ,  C12P19/36

Abstract: 本发明公开了一种促进细胞内辅酶NADPH再生的集胞藻PCC6803工程藻及构建方法及应用。将催化辅酶NADPH再生的铁氧还蛋白‑NADP+还原酶FNR的基因petH通过同源重组得到重组质粒pKW‑Ω‑PpetE‑petH，再将该质粒转化到集胞藻PCC6803中，通过同源重组使FNR基因整合到集胞藻染色体DNA中，可通过Cu2+浓度调控FNR的高强度表达。通过该方法构建的工程藻可促进FNR过量表达，增加胞内FNR总酶活，极大的促进胞内辅酶NADPH再生效率。本发明方法得到的藻株通过促进微藻胞内辅酶NADPH的再生，可应用于对辅酶需求量大的生物催化与转化过程及生物技术领域中，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN105567621A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610075742.X

申请日：2016-02-03

Applicant: 武汉科技大学

Inventor： 杨忠华 ,  邓新星 ,  罗伟 ,  阮涛 ,  侯亚利 ,  周卫 ,  龚志伟 ,  黄皓

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12P7/02 ,  C12P19/36

Abstract: 本发明公开了一种促进细胞内辅酶NADPH再生的集胞藻PCC6803工程藻及构建方法及应用。将催化辅酶NADPH再生的铁氧还蛋白-NADP+还原酶FNR的基因petH通过同源重组得到重组质粒pKW-Ω-PpetE-petH，再将该质粒转化到集胞藻PCC6803中，通过同源重组使FNR基因整合到集胞藻染色体DNA中，可通过Cu2+浓度调控FNR的高强度表达。通过该方法构建的工程藻可促进FNR过量表达，增加胞内FNR总酶活，极大的促进胞内辅酶NADPH再生效率。本发明方法得到的藻株通过促进微藻胞内辅酶NADPH的再生，可应用于对辅酶需求量大的生物催化与转化过程及生物技术领域中，具有广泛的应用前景。