公开(公告)号：CN119506399A

公开(公告)日：2025-02-25

申请号：CN202411732751.2

申请日：2024-11-29

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  彭双 ,  肖珩

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6886 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本申请公开了一种提取肿瘤、传染病体液游离核酸的方法、试剂盒及应用。本申请提供的提取方法提取效率高；通过对比，其提取质量是传统剂盒提取的10倍。本申请提供的试剂盒包括特异性MOF吸附试剂、裂解液、分离剂、核酸保存管，其中特异性MOF吸附试剂能够通过特异性免疫磁珠来对患者体液中的游离核酸进行捕获，然后通过裂解液、分离剂将游离核酸分离提取出来。通过本申请所提供的试剂盒能够针对性地提取肿瘤或传染病体液中的游离核酸，排除了其它正常细胞DNA的干扰，可用于PCR扩增、基因表达、基因测序、芯片检测、文库构建、高通量测序等科研或临床诊断分析，使得后续的检测结果更精准，检出效果更好。

公开(公告)号：CN119372318A

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202411732580.3

申请日：2024-11-29

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  彭双 ,  肖珩

IPC: C12Q1/6886

Abstract: 本申请公开了一种用于检测肝癌的标志物及应用，属于肝癌诊断技术领域。该标志物包括C1QTNF4、SETBP1、HMGA1、PCDHB3、CYBA、ZNF541中至少一个细胞外游离RNA(cfRNA)，本申请通过在健康人群、HCC患者和肝癌患者进行验证，证明这6种标志物水平在组间存在显著性差异并具有稳定性，适合从乙型肝炎的高危人群中发现尚未出现临床症状的早期肝癌患者，起到早发现的效果。本申请还提供的诊断肝癌高危人群或肝癌早期诊断试剂盒，该试剂盒能够进一步实现肝癌的个体化诊断，通过取血检测就能实现诊断，无需额外采集组织样本，大大减少创伤风险，更适合早期肝癌大规模人群筛查，具有良好的临床使用和推广价值。

公开(公告)号：CN115109845A

公开(公告)日：2022-09-27

申请号：CN202110291810.7

申请日：2021-03-18

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  危琦 ,  韩少卿 ,  袁可欣 ,  翁小成

IPC: C12Q1/6869

Abstract: 本发明提供一种RNA中次黄嘌呤的高通量测序检测方法，包括如下步骤：步骤1)：用高碘酸钠溶液对RNA样品进行处理；步骤2)：将步骤1)处理后的RNA样品用Endonuclease V进行酶切反应；步骤3)：将步骤1)处理后的RNA样品和步骤2)酶切反应后的RNA样品分别进行文库构建；步骤4)：对步骤3)得到的两组文库测序，比较两组测序结果，确定富集reads，回溯富集reads的酶切位点找到突变的位点，即找到次黄嘌呤修饰位点。其高特异性、高灵敏度，操作简便。

公开(公告)号：CN114350662A

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202111508264.4

申请日：2021-12-10

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  翁小成 ,  唐恒 ,  彭俊然

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/115 ,  C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  G01N21/84

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR的多色、正交、高灵敏度的RNA成像方法，属于RNA成像技术领域。本发明基于Cas13 sgRNA和适配子，设计了插入具有重复结构适配子的sgRNA‑适配子，利用其与的dCas13b的结合，建立了一种多色、高效、正交的RNA成像方法。本发明的设计提高了sgRNA‑适配子的稳定性，并在不影响靶向性的前提下提高信噪比，实现低丰度RNA的成像和RNA相互作用的可视化。本发明具有普适性，可针对不同靶标RNA设计spacer序列进行荧光成像；本发明在进行多靶标多色成像时，只需一种dCas13b蛋白和几种sgRNA‑适配子，减少了蛋白设计成本和相关的实验操作。

公开(公告)号：CN111979301B

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202010863662.7

申请日：2020-08-25

Applicant: 武汉大学

Inventor： 杜宇昊 ,  周翔 ,  张雅君

IPC: C12Q1/682

Abstract: 本发明提供了一种同时检测多种RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计catch probe和report probe；2)将步骤1)设计的catch probe和report probe分别退火形成发卡结构；3)加入步骤2)退火后的report probe、步骤2)退火后的catch probe、RNA酶抑制剂、NEase和RNA，孵育，然后对NEase进行灭活，检测体系中的荧光信号。本发明检测方法可以对含有多种miRNA的样品进行检测，并对多种miRNA同时进行检测；其利用NEase增强荧光信号，从而增强检测的灵敏度，降低检测下限。

公开(公告)号：CN113774121A

公开(公告)日：2021-12-10

申请号：CN202111066944.5

申请日：2021-09-13

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  翁小成 ,  秦珊珊 ,  韩少卿

IPC: C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了一种基于RNA连接标签的低样本量m6A高通量测序方法，属于RNA的高通量测序领域。本发明方法包括以下步骤：将含有不同barcode标签序列的3’linker进行磷酸化处理、腺苷化处理；腺苷化处理后的3’‑linker分别连接到不同来源的打断后的RNA样品上，混合样品后留出input对照样品用于RNA‑seq，剩余混合样品进行m6A抗体免疫沉淀得到IP样品用于m6A‑seq，最终得到二代测序文库并测序；根据barcode序列对测序数据进行拆分和分析，得到初始单个样本的RNA‑seq及m6A‑seq信息。本发明可同时实现多个临床低样本量样品的m6A抗体免疫沉淀以及建库测序。

公开(公告)号：CN106868155B

公开(公告)日：2020-03-10

申请号：CN201710154441.0

申请日：2017-03-15

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  刘奕侬 ,  王少儒 ,  田沺 ,  张小娥 ,  黄俊捷 ,  杨伊文 ,  朱子睿

IPC: C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法。本发明方法包含三部分，第一部分引物的产生，发卡探针I被靶标miRNA打开后，被核酸外切酶I降解单链部分，而后核糖核酸酶H降解DNA：RNA杂合链中的RNA，留下一段短链DNA；第二部分是树状滚环扩增，上一步产生的单链DNA连接长单链DNA探针成环作为模板，然后以该单链DNA为引物进行一级滚环扩增，在滚环扩增体系中引入的发卡茎环结构II，被一级滚环扩增产物打开，从而多级树枝状滚环扩增；第三部分是根据滚环扩增产物中含有的G‑四链体进行检测。本发明是一种灵敏、经济、方便、原位的可视化检测miRNA的方法。

公开(公告)号：CN107573289B

公开(公告)日：2019-07-09

申请号：CN201710823037.8

申请日：2017-09-13

Applicant: 武汉大学

Inventor： 周翔 ,  王雅芬 ,  刘朝兴 ,  吴凡

IPC: C07D235/16 ,  C07H19/073 ,  C07H1/00 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明公开了一种特异性化学标记5‑醛基尿嘧啶的化合物及标记方法和应用。通过带有叠氮基团的化合物1可以选择性的和5‑醛基尿嘧啶的醛基发生反应，再加入带有炔基的生物素DBCO‑S‑S‑PEG3‑biotin和叠氮发生不需要催化剂的click反应。利用本发明的5‑醛基尿嘧啶特异性化学标记方法，可实现特异性富集含5‑醛基尿嘧啶的核酸样品，分析核酸分子中5‑醛基尿嘧啶的序列分布信息。本发明为表观遗传学及核酸化学生物学研究领域提供了有效的研究方法。

公开(公告)号：CN105506136B

公开(公告)日：2019-01-29

申请号：CN201610040179.2

申请日：2016-01-21

Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 ,  武汉大学

Inventor： 周翔 ,  肖珩 ,  王少儒 ,  杨雨青 ,  李娓

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6876

Abstract: 本发明涉及一种检测microRNA的方法和试剂盒：向含microRNA的体系中加入microRNA检测探针，探针末端区域与靶标microRNA以碱基配对的方式结合，再加入T4 DNA连接酶，使探针的3’端和5’端连接起来，形成环状结构；然后加入5’端修饰有生物素的DNA引物，并加入Phi 29 DNA聚合酶，进行滚环扩增；扩增结束后，将链霉亲和素磁珠加入到待测体系中，利用铁磁体钓取后洗脱；随后，将修饰有DNA的上转换材料加入到待测体系中，上转换材料上的单链DNA与磁珠上钓取出的引物DNA以碱基配对结合，孵育后，利用铁磁体将磁珠吸附，洗脱掉未配对结合的上转换材料，留下的磁珠吸附的上转换材料部分作为信号输出；最后，在荧光分光光度计上，使用980nm的激发光激发，得到上转换材料的荧光信号来检测microRNA含量。

公开(公告)号：CN108410910A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810163046.3

申请日：2018-02-26

Applicant: 武汉大学

Inventor： 邓鹤翔 ,  周翔 ,  彭双 ,  别秉霖

IPC: C12N15/87

Abstract: 本发明提供一种基于MOFs孔道限域效应的核酸转染方法，通过选用一维孔道的MOFs体系作为难以实现高效转染的免疫细胞的转染载体，通过MOFs材料的限域效应成功负载核酸分子，并成功对多种免疫细胞进行转染实验，相比于传统转染试剂具有更高的效率，更低的成本和更小的毒性，且对负载于其中的核酸分子有良好的保护作用，使其在血清中不会被分解，为普适性转染的MOFs材料设计提供了基础。