可利霉素的纯化工艺
    3.
    发明公开

    公开(公告)号:CN101921302A

    公开(公告)日:2010-12-22

    申请号:CN201010229139.5

    申请日:2010-07-16

    Abstract: 本发明公开了一种从发酵液提取可利霉素的纯化工艺,包括如下步骤:(1)向发酵液中加入絮凝剂沉淀蛋白,过滤获得滤液;(2)用溶媒萃取法从步骤(1)获得的发酵滤液中提取可利霉素,取得酯相;(3)用盐溶液、纯水交替洗涤步骤(2)获得的酯相;(4)用反萃取法将可利霉素从酯相反萃取到水相;(5)将步骤(4)得到的水相可利霉素结晶、干燥,获得成品。该纯化方法通过萃取,尤其是通过缓冲盐溶液洗涤萃取相,去除了其中残留的螺旋霉素,优化了可利霉素的组分配比,所得产品符合质量指标要求,而洗涤液中的螺旋霉素可以分离回收,大大提高了产品的质量和收率。

    一种重组人复合α干扰素的制备方法

    公开(公告)号:CN1733929A

    公开(公告)日:2006-02-15

    申请号:CN200510028285.0

    申请日:2005-07-29

    Abstract: 本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法,其主要步骤是:将酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN,其特征在于,在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛匍糖苷或/和Brij35,加入量为0.01~10g/L发酵液;外源蛋白诱导表达的温度控制在20~30℃;外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0~7.0且发酵液中的甲醇含量控制在1.0~10.0g/L发酵液。本发明不仅实现了cIFN的高密度高发酵表达,而且使cIFN在发酵液中维持了正确的单体分子状态和生物活性,大大抑制了cIFN聚合体和降解产物的形成。

    一种重组人复合α干扰素的制备方法

    公开(公告)号:CN100372933C

    公开(公告)日:2008-03-05

    申请号:CN200510028285.0

    申请日:2005-07-29

    Abstract: 本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法,其主要步骤是:将酵母工程菌(PichiapastorisGS115/pPIC9K-CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN,其特征在于,在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、TritonX-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛匍糖苷或/和Brij35,加入量为0.01~10g/L发酵液;外源蛋白诱导表达的温度控制在20~30℃;外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0~7.0且发酵液中的甲醇含量控制在1.0~10.0g/L发酵液。本发明不仅实现了cIFN的高密度高发酵表达,而且使cIFN在发酵液中维持了正确的单体分子状态和生物活性,大大抑制了cIFN聚合体和降解产物的形成。

    可利霉素的纯化工艺
    9.
    发明授权

    公开(公告)号:CN101921302B

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201010229139.5

    申请日:2010-07-16

    Abstract: 本发明公开了一种从发酵液提取可利霉素的纯化工艺,包括如下步骤:(1)向发酵液中加入絮凝剂沉淀蛋白,过滤获得滤液;(2)用溶媒萃取法从步骤(1)获得的发酵滤液中提取可利霉素,取得酯相;(3)用盐溶液、纯水交替洗涤步骤(2)获得的酯相;(4)用反萃取法将可利霉素从酯相反萃取到水相;(5)将步骤(4)得到的水相可利霉素结晶、干燥,获得成品。该纯化方法通过萃取,尤其是通过缓冲盐溶液洗涤萃取相,去除了其中残留的螺旋霉素,优化了可利霉素的组分配比,所得产品符合质量指标要求,而洗涤液中的螺旋霉素可以分离回收,大大提高了产品的质量和收率。

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