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公开(公告)号：CN118185973A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410398537.1
申请日：2024-04-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/70 , C07K16/06 , C07K16/40 , C12N9/10 , G01N33/573 , G01N33/68 , A61K39/395 , A61P31/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，尤其涉一种鸡TRIM27.2截短体重组蛋白及制备方法及应用、多克隆抗体及制备方法及应用，包括以下步骤：以鸡巨噬细胞系HD11总RNA反转录后的cDNA为模版，进行PCR扩增获得编码鸡TRIM27.2截短体重组蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；将扩增获得的编码鸡TRIM27.2截短体重组蛋白的基因插入到pColdI载体的酶切位点之间获得重组载体；将所述原核表达载体转入到感受态细胞中，得到重组菌；将所述重组菌进行培养，当培养液的OD_600值为0.6～0.8时，加入IPTG进行诱导表达，经分离、纯化、复性，得到鸡TRIM27.2截短体重组蛋白。本发明构建的鸡TRIM27.2截短体重组蛋白，避免全长表达不稳定的缺点，同时免疫效果更加稳定且产生的抗体水平较高，制备的鸡TRIM27.2的多克隆抗体能用于验证TRIM27.2对IBDV等病毒复制调控的机制。
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公开(公告)号：CN118185973B
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410398537.1
申请日：2024-04-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/70 , C07K16/06 , C07K16/40 , C12N9/10 , G01N33/573 , G01N33/68 , A61K39/395 , A61P31/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，尤其涉一种鸡TRIM27.2截短体重组蛋白及制备方法及应用、多克隆抗体及制备方法及应用，包括以下步骤：以鸡巨噬细胞系HD11总RNA反转录后的cDNA为模版，进行PCR扩增获得编码鸡TRIM27.2截短体重组蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；将扩增获得的编码鸡TRIM27.2截短体重组蛋白的基因插入到pColdI载体的酶切位点之间获得重组载体；将所述原核表达载体转入到感受态细胞中，得到重组菌；将所述重组菌进行培养，当培养液的OD_600值为0.6～0.8时，加入IPTG进行诱导表达，经分离、纯化、复性，得到鸡TRIM27.2截短体重组蛋白。本发明构建的鸡TRIM27.2截短体重组蛋白，避免全长表达不稳定的缺点，同时免疫效果更加稳定且产生的抗体水平较高，制备的鸡TRIM27.2的多克隆抗体能用于验证TRIM27.2对IBDV等病毒复制调控的机制。
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公开(公告)号：CN118028430B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410348373.1
申请日：2024-03-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6809 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A61P3/00
Abstract: 本发明公开了一种IBDV侵染致代谢重塑的miRNA筛选方法和应用，所述方法选择鸡巨噬细胞系(HD11)为研究对象，分别使用禽法氏囊病病毒(IBDV)、氨基酸饥饿(AAS)和葡萄糖饥饿(GS)处理细胞，收集空白对照组(Ctrl)与不同处理组细胞样本进行miRNA测序，并对处理组间的差异结果取交集，最终精准获得IBDV侵染进程中与代谢调控相关的miRNA，这些miRNA被认为是IBDV诱导宿主代谢重塑致免疫抑制的潜在因素。其中，gga‑miR204/211在代谢应激条件下表达升高而IBDV的侵染导致其异常降低，通过分析发现其靶基因MAP1LC3B(自噬标记基因)作为能量匮乏的分子标志物能够影响IBDV的复制。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117821469B
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202311563075.6
申请日：2023-11-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/465 , C12N15/70 , C07K16/06 , A61K39/395 , A61K35/02
Abstract: 本发明公开了一种鸡TRIM45截短体重组蛋白或其多克隆抗体的应用。本发明公开了一种鸡TRIM45基因、重组载体、截短体重组蛋白或其多克隆抗体在制备抗禽白血病病毒相关药物中的应用，所述鸡TRIM45基因Genbank登录号为XM_040707211。本发明构建的鸡TRIM45截短体重组蛋白，避免了全长表达稳定性的缺点，同时免疫效果更加稳定且抗体水平较高。同时本发明制备的真核表达载体和多克隆抗体可应用于鸡TRIM45对ALV‑J复制调控的机制研究，具有深远意义，弥补了鸡TRIM45抗体制备及研究的空白；为鸡抗ALV‑J感染和免疫调节的机制研究提供新思路。
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公开(公告)号：CN118028430A
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202410348373.1
申请日：2024-03-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6809 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A61P3/00
Abstract: 本发明公开了一种IBDV侵染致代谢重塑的miRNA筛选方法和应用，所述方法选择鸡巨噬细胞系(HD11)为研究对象，分别使用禽法氏囊病病毒(IBDV)、氨基酸饥饿(AAS)和葡萄糖饥饿(GS)处理细胞，收集空白对照组(Ctrl)与不同处理组细胞样本进行miRNA测序，并对处理组间的差异结果取交集，最终精准获得IBDV侵染进程中与代谢调控相关的miRNA，这些miRNA被认为是IBDV诱导宿主代谢重塑致免疫抑制的潜在因素。其中，gga‑miR204/211在代谢应激条件下表达升高而IBDV的侵染导致其异常降低，通过分析发现其靶基因MAP1LC3B(自噬标记基因)作为能量匮乏的分子标志物能够影响IBDV的复制。
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公开(公告)号：CN117821469A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202311563075.6
申请日：2023-11-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/465 , C12N15/70 , C07K16/06 , A61K39/395 , A61K35/02
Abstract: 本发明公开了一种鸡TRIM45截短体重组蛋白或其多克隆抗体的应用。本发明公开了一种鸡TRIM45基因、重组载体、截短体重组蛋白或其多克隆抗体在制备抗禽白血病病毒相关药物中的应用，所述鸡TRIM45基因Genbank登录号为XM_040707211。本发明构建的鸡TRIM45截短体重组蛋白，避免了全长表达稳定性的缺点，同时免疫效果更加稳定且抗体水平较高。同时本发明制备的真核表达载体和多克隆抗体可应用于鸡TRIM45对ALV‑J复制调控的机制研究，具有深远意义，弥补了鸡TRIM45抗体制备及研究的空白；为鸡抗ALV‑J感染和免疫调节的机制研究提供新思路。
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公开(公告)号：CN115948397A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211162746.3
申请日：2022-09-23
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/53 , C12N15/55 , C12N5/10 , C12N5/0786
Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除鸡TET2基因的sgRNA及CRISPR/Cas9系统与应用，所述sgRNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4任一所示，本发明还公开了靶向敲除鸡TET2基因的CRISPR‑Cas9系统，以及该系统在敲除鸡TET2基因的细胞株中的应用。本发明通过CRISPR‑Cas9技术首次靶向敲除鸡巨噬细胞系(HD11)的TET2基因，适用于较难转染和抗生素筛选敏感的免疫细胞，且确保了细胞中不含有转基因片段，同时发现敲除TET2基因的HD11细胞具有免疫抑制特征，为鸡免疫抑制机制的研究提供了理想模型。
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公开(公告)号：CN118325903A
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202410621356.0
申请日：2024-05-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种用于靶向敲除鸡TRIM45基因的sgRNA、TRIM45敲除细胞系及其应用，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明设计了一种特异性靶向TRIM45第一个外显子的sgRNA，通过CRISPR‑Cas9技术成功敲除鸡成纤维细胞TRIM45基因。通过检测蛋白和mRNA表达都证实敲除细胞构建成功，虽然TRIM45敲除细胞的形态未发生明显变化，但接触抑制能力明显减弱，首次获得稳定传代的TRIM45敲除的鸡源细胞系。本发明构建的TRIM45敲除细胞系，在不同感染那时间点均显著增强了ALV‑J复制水平，能够用于提高未来ALV‑J疫苗的抗原表达量。本发明构建的TRIM45敲除细胞系，也能够显著抑制IBDV的复制水平，是具有IBDV抗性表型的细胞系，为IBDV的致病机制研究和抗病毒育种提供生物材料。
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