公开(公告)号：CN106047819A

公开(公告)日：2016-10-26

申请号：CN201610700713.8

申请日：2016-08-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 赵国琦 ,  詹康 ,  赵倩明 ,  左晓昕 ,  林淼 ,  严康

IPC: C12N5/10 ,  C12R1/91

CPC classification number: C12N5/0679 ,  C12N2500/25 ,  C12N2500/32 ,  C12N2501/11 ,  C12N2501/39 ,  C12N2510/04

Abstract: 本发明提供了一种永生化山羊小肠上皮细胞系及其建立方法。该方法步骤以下：通过组织块培养原代山羊小肠细胞，随后永生化原代培养的细胞，并通过标记刮除法纯化山羊小肠上皮细胞，最后建立永生化的山羊小肠上皮细胞系。该永生化山羊小肠上皮细胞在培养的过程中无需添加任何细胞生长因子，操作方便简单，且比原代细胞培养节省大量的成本；现有技术中通常采用先纯化再永生化细胞的方法，本发明方法采用标记法来逐步刮除纯化永生化的山羊小肠上皮细胞，避免了现有技术中因培养时间延长使山羊小肠上皮细胞衰老，最终造成细胞永生化失败的缺陷。

公开(公告)号：CN105132353A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510528956.3

申请日：2015-08-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 赵国琦 ,  詹康 ,  林淼 ,  贡笑笑 ,  左晓昕

IPC: C12N5/00 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明提供了一种获取单克隆细胞的方法，其具体步骤如下：(1)胰酶分离消化细胞，用完全培养基终止消化，制成单细胞悬液；(2)吸取适量单细胞悬液至微孔板的一个孔中，放置在显微镜下数出该悬液中的细胞总数，并且通过增减细胞悬液体积，使得该孔内细胞总数达到所需克隆的数量；(3)吸取适量培养基悬浮该孔内的细胞，再将其转移至含有培养基的具有易于均匀分散单细胞的结构的储液槽内，该培养基的体积为步骤(4)中准备加入微孔板各孔内培养基体积的总和；(4)吸取适量细胞悬液至微孔板各孔中，进行培养；(5)培养一至两周。该方法操作方法简单，并能最大限度地获得较多孔的单克隆细胞，建立单克隆细胞系成功率较高。