公开(公告)号：CN106010995B

公开(公告)日：2019-12-03

申请号：CN201610013009.5

申请日：2016-01-07

Applicant: 扬州大学 ,  扬州市瑞怡生物科技有限公司

Inventor： 赵国琦 ,  戴怡 ,  张艳云 ,  霍永久 ,  余同水 ,  贡笑笑 ,  詹康

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/11

Abstract: 本发明公开了一种巨大芽孢杆菌制剂发酵的方法。其主要步骤为：先在水中加入玉米淀粉、豆粕粉、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠和氯化钙，调整pH值后灭菌处理，在121～123℃温度条件下灭菌处理，冷却到35℃左右接入巨大芽孢杆菌种，发酵20小时，制得对数期巨大芽孢杆菌发酵液，然后将发酵液接入固体培养载体中，固体培养载体为玉米粉、豆粕粉、疏松剂、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锌，混合均匀，调整含水量，置于固体发酵罐罐内，通入无菌空气，无菌保湿培养48～60小时，待显微镜观察发现有80％以上的芽孢脱落，终止发酵，然后向发酵罐通入60℃的蒸汽进行低温干燥，直至固体载体的含水量在5％以下，粉碎固体载体，粉碎粒度200目，制成芽孢杆菌产品，调配，达到每克产品含孢子≥100亿。

公开(公告)号：CN105132353A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510528956.3

申请日：2015-08-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 赵国琦 ,  詹康 ,  林淼 ,  贡笑笑 ,  左晓昕

IPC: C12N5/00 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明提供了一种获取单克隆细胞的方法，其具体步骤如下：(1)胰酶分离消化细胞，用完全培养基终止消化，制成单细胞悬液；(2)吸取适量单细胞悬液至微孔板的一个孔中，放置在显微镜下数出该悬液中的细胞总数，并且通过增减细胞悬液体积，使得该孔内细胞总数达到所需克隆的数量；(3)吸取适量培养基悬浮该孔内的细胞，再将其转移至含有培养基的具有易于均匀分散单细胞的结构的储液槽内，该培养基的体积为步骤(4)中准备加入微孔板各孔内培养基体积的总和；(4)吸取适量细胞悬液至微孔板各孔中，进行培养；(5)培养一至两周。该方法操作方法简单，并能最大限度地获得较多孔的单克隆细胞，建立单克隆细胞系成功率较高。

公开(公告)号：CN107881197A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201711144970.9

申请日：2017-11-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 赵国琦 ,  贡笑笑 ,  詹康 ,  姜茂成

IPC: C12N15/86 ,  C12N15/37 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

CPC classification number: C12N15/86 ,  C07K14/005 ,  C12N5/0679 ,  C12N2510/04 ,  C12N2710/22022

Abstract: 本发明提供一种永生化奶牛瘤胃上皮细胞系及其构建方法，所述构建方法包括如下步骤：步骤a)将采集到的奶牛瘤胃上皮组织在培养基中剪碎清洗消化后进行原代培养，得到瘤胃上皮细胞；步骤b)将步骤a)所述的瘤胃上皮细胞与携带SV40T抗原基因的病毒液进行孵育得到感染的瘤胃上皮细胞；步骤c)将步骤b)感染的瘤胃上皮细胞进一步培养得到永生化的奶牛瘤胃上皮细胞系。本发明的永生化奶牛瘤胃上皮细胞系为奶牛瘤胃生理调控和营养吸收机制研究提供试验细胞模型，培养方法简单、生长速度快，本发明的构建方法可获得具有生理功能且能连续传代的BRECs。

公开(公告)号：CN106635914A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201710000667.5

申请日：2017-01-03

Applicant: 扬州大学

Inventor： 林淼 ,  赵国琦 ,  霍永久 ,  贡笑笑 ,  王梦琦 ,  张蒙

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/02 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12N1/20 ,  C12N1/02

Abstract: 本发明涉及一种从瘤胃液中获取硝酸盐还原菌的方法，属于微生物研究技术领域。本发明方法包括制备瘤胃硝酸盐还原菌纯培养发酵液、制备富集培养液、接种培养的步骤。本发明利用选择性培养基，特定去氧剂，可实现每毫升含活菌数达≥106。本发明所述瘤胃硝酸盐还原菌的制备方法，避免了使用硫化钠可能产生的黑色沉淀颗粒，同时实现了菌的富集扩繁，提高了总菌含量，为科研提供材料。

公开(公告)号：CN106010995A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610013009.5

申请日：2016-01-07

Applicant: 扬州大学 ,  扬州市瑞怡生物科技有限公司

Inventor： 赵国琦 ,  戴怡 ,  张艳云 ,  霍永久 ,  余同水 ,  贡笑笑 ,  詹康

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/11

Abstract: 本发明公开了一种巨大芽孢杆菌制剂发酵的方法。其主要步骤为：先在水中加入玉米淀粉、豆粕粉、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠和氯化钙，调整pH值后灭菌处理，在121～123℃温度条件下灭菌处理，冷却到35℃左右接入巨大芽孢杆菌种，发酵20小时，制得对数期巨大芽孢杆菌发酵液，然后将发酵液接入固体培养载体中，固体培养载体为玉米粉、豆粕粉、疏松剂、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锌，混合均匀，调整含水量，置于固体发酵罐罐内，通入无菌空气，无菌保湿培养48～60小时，待显微镜观察发现有80％以上的芽孢脱落，终止发酵，然后向发酵罐通入60℃的蒸汽进行低温干燥，直至固体载体的含水量在5％以下，粉碎固体载体，粉碎粒度200目，制成芽孢杆菌产品，调配，达到每克产品含孢子≥100亿。