公开(公告)号：CN119162354A

公开(公告)日：2024-12-20

申请号：CN202411405722.5

申请日：2024-10-10

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张臣臣 ,  孙月 ,  胡梦灵 ,  顾瑞霞 ,  邵俊 ,  吴忧 ,  陈大卫 ,  关成冉

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开一种乳酸菌基因完全敲除缺陷型的选择计数方法，设计待计数菌体基因敲除区域嵌套引物，以待计数菌体基因敲除缺陷型的DNA为模板扩增特异性片段，构建缺陷型菌株计数载体，绘制缺陷型菌株标准曲线；在缺陷型缺失基因内设计野生型计数引物，构建野生型菌株区分专用载体，绘制野生型菌株标准曲线；提取待计数菌体基因组DNA，控制退火延伸时间，采用敲除区域嵌套引物进行两步法qPCR扩增，对待计数菌体的完全敲除缺陷型进行计数。本发明能够对野生型及缺陷型进行区分，达到定量计数的目的，以分析样品中基因工程菌的变化规律，进而更好地分析目的基因在生物进化、合成菌落和食品生产中的作用，为食品的精准设计和开发提供技术支持。