公开(公告)号：CN119410615A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411582571.0

申请日：2024-11-07

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  杨果 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，公开了一种具有产壳四糖能力的壳聚糖酶突变体及其应用。将来源于枯草芽孢杆菌的GH46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，对BsCsn46A第203位氨基酸残基进行饱和突变筛选出具有产壳四糖潜力的突变体，获得的壳聚糖酶突变体为E203M，E203S，E203R，E203H，E203N，E203C，E203Q，E203G，E203T，E203V，E203P。通过水解结果分析，获得的突变体具有产壳四糖的能力。

公开(公告)号：CN116949015A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202310871726.1

申请日：2023-07-17

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  吴洁 ,  高文君 ,  满在伟

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12P19/04 ,  C12P19/14

Abstract: 本发明公开了一种酶催化活性提高的壳聚糖酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。所述壳聚糖酶来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶（BsCsn46A），所述壳聚糖酶突变体为BsCsn46A氨基酸序列第203位谷氨酸突变成小体积侧链氨基酸丙氨酸，所述突变体为E203A，该突变体以壳聚糖为底物，催化活性比野生型显著提高。

公开(公告)号：CN116855478A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202310856865.7

申请日：2023-07-13

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  高文君 ,  满在伟

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12P19/00 ,  C12P19/12 ,  C12P19/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种改变底物通道酸碱性的催化活性提高的壳聚糖酶突变体。基于底物通道调控的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶BsCsn46A，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的壳聚糖酶的第49位丙氨酸突变为碱性氨基酸赖氨酸，所述突变体为A49K。本发明的壳聚糖酶突变体与野生型壳聚糖酶相比，该突变体以壳聚糖为底物，催化活性比野生型提高了1.13倍。

公开(公告)号：CN116656654A

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202310718012.7

申请日：2023-06-16

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  高文君 ,  陈培滔 ,  丁飞 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种改变产物聚合度的壳聚糖酶突变体及其应用。将来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，第50位苏氨酸突变成大体积疏水侧链氨基酸W或小体积侧链氨基酸A；突变体分别为T50A、T50W。与原始酶相比，壳聚糖酶突变体酶水解壳聚糖除产生COS2和COS3外，还有壳四糖（COS4）生成。

公开(公告)号：CN119464257A

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202411582567.4

申请日：2024-11-07

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  陈宇杨 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种壳聚糖酶突变体及其在制备壳四糖中的应用，属于酶工程领域。本发明通过对枯草芽孢杆菌壳聚糖酶BsCsn46A氨基酸序列（SEQ ID NO:1）第149位进行定点饱和突变筛选出水解产物具有壳四糖潜力的突变体，将天冬氨酸突变为甘氨酸，标记为D149G，突变体水解产物除了壳二糖，壳三糖，还有壳四糖。

公开(公告)号：CN116590260A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310730901.5

申请日：2023-06-20

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  高文君 ,  刘奇 ,  丁飞 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种产壳四糖的壳聚糖酶突变体。所述壳聚糖酶来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），以氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的壳聚糖酶BsCsn46A为出发酶，通过计算机辅助模拟分析壳聚糖酶底物通道，同时将BsCsn46A与底物进行分子对接，确定可能会对壳聚糖酶水解产物聚合度有影响的氨基酸位点，对这些氨基酸位点进行定点突变，分别突变成酸性氨基酸E（谷氨酸）及碱性氨基酸K（赖氨酸）。本发明获得两种壳聚糖酶突变体T50E和E203K，与原始酶相比，突变体酶水解壳聚糖除产生COS2和COS3外，还有壳四糖（COS4）生成。

公开(公告)号：CN119410614A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411582568.9

申请日：2024-11-07

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  吴帅 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及产壳四糖的壳聚糖酶突变体及其应用，属于酶工程领域。具体的：所述壳聚糖酶来源于枯草芽孢杆菌的GH46家族糖苷水解酶（BsCsn46A），壳聚糖酶突变体为BsCsn46A氨基酸序列的第151位天冬氨酸突变为丝氨酸，突变体为D151S；或突变为苏氨酸，突变体为D151T；或突变为络氨酸，突变体为D151Y。突变体具有水解壳聚糖产壳四糖的能力。

公开(公告)号：CN116676297A

公开(公告)日：2023-09-01

申请号：CN202310730902.X

申请日：2023-06-20

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  高文君 ,  王朝 ,  丁飞 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于酶工程技术领域，公开了单产壳二糖的壳聚糖酶突变体。对来源于枯草芽孢杆菌中克隆的新的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示进行定点突变，壳聚糖酶的突变体为G21W、E235R、Y236K，通过水解反应分析，发现与原始酶水解壳聚糖的产物为壳二糖（COS2）和壳三糖（COS3）不同的是，本发明的突变体壳聚糖酶的水解产物主要为COS2。

公开(公告)号：CN119410616A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411582572.5

申请日：2024-11-07

Applicant: 常州大学

Inventor： 郭静 ,  丁飞 ,  吴洁 ,  满在伟

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种壳聚糖酶BsCsn46A突变体及其在制备壳四糖中的应用，通过对壳聚糖酶底物通道关键位点突变，获得产壳四糖潜力的壳聚糖酶突变体，属于酶工程领域。来源于枯草芽孢杆菌的GH46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。具体的：对BsCsn46A第50位氨基酸残基进行饱和突变，筛选出具有产壳四糖潜力的突变体，突变体为T50V，T50G，T50Y，T50L，T50F，T50S，T50I，T50R，T50C，T50D，T50P，T50Q，T50H，T50N。通过水解结果分析，与野生型水解产物相比，壳聚糖酶突变体更具有产壳四糖的潜力。