公开(公告)号：CN119530170A

公开(公告)日：2025-02-28

申请号：CN202411533407.0

申请日：2024-10-31

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学 ,  广东精捷检验检测有限公司

Inventor： 李红梅 ,  陈瑞爱 ,  熊挺 ,  申瀚钦 ,  赵希雅 ,  梁雪静 ,  刘定祥

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/50 ,  C07K14/165 ,  C07K1/22 ,  C07K1/34 ,  C07K1/36 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种一种PEDV N蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用，该方法包括对PEDV N蛋白进行原核表达，并进行纯化，得到PEDV N蛋白；将纯化后的PEDV N蛋白与等体积弗氏佐剂乳化，多点位注射8周龄的雌性BALB/c小鼠，两周免疫一次；按5：1比例取已加强免疫3天后的小鼠的脾细胞与对数生长期的SP2/0细胞混合均匀，在PEG1500作用下进行细胞融合，融合后的细胞混合液使用HAT培养基培养；采用间接ELISA方法筛选出分泌抗体能力强的阳性孔，并采用有限稀释法进行亚克隆，获得6株分泌抗体的细胞株；采用体内诱生腹水法对PEDV N蛋白mAb进行制备。本发明制备得到的PEDV N蛋白单克隆抗体均可特异性高效结合，能够作为PEDV病毒感染和抗感染机制研究的抗体工具。

公开(公告)号：CN119220506A

公开(公告)日：2024-12-31

申请号：CN202411243968.7

申请日：2024-09-05

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  古倩儿 ,  胡梓弘 ,  杨蓓 ,  何佳文 ,  陈瑞爱

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/50 ,  A61K39/17 ,  A61K39/215 ,  A61K39/295 ,  A61P31/22 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供一种表达IBV S蛋白的基因VII型NDV重组病毒及其制备方法和应用，该方法包括：在pBR322‑DHN3mF病毒基因组的P基因和M基因之间插入经修饰的S基因，得到重组病毒rDHN3mF‑MH20S1‑IBVS2、rDHN3mF‑H120‑S6P、rDHN3mF‑H120‑S6P‑GSAS中的任一种。本发明通过将适应细胞株的IBV‑P65的S2区域与QX型IBV MH20的S2区域进行替换，拯救出重组病毒rDHN3mF‑MH20S1‑IBVS2；通过将H120‑S蛋白上的第692位、第768位、第772位、第815位、第862位、第863位疏水性氨基酸均突变为脯氨酸拯救出重组病毒rDHN3mF‑H120‑S6P；在突变6个疏水性氨基酸为脯氨酸的基础上，将第533位‑第537位的氨基酸依次突变为甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、丝氨酸后拯救出重组病毒rDHN3mF‑H120‑S6P‑GSAS。将拯救出的三株重组病毒分别感染BHK‑21细胞，经WB验证能检测到S蛋白以及NDV全蛋白的高效表达。

公开(公告)号：CN118496325A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410623114.5

申请日：2024-05-20

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  肇庆大华农生物药品有限公司

Inventor： 陈瑞爱 ,  熊挺 ,  刘定祥 ,  李小静 ,  董国初

IPC: C07K14/165 ,  C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/62 ,  C12N5/10 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种用于PEDV亚单位疫苗的抗原及其制备方法、疫苗。其中，抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其可通过CHO‑K1细胞稳定表达。本发明还基于该抗原制备了PEDV亚单位疫苗，该疫苗相对于其他疫苗具有刺激机体产生抗体快、免疫副反应小、免疫抗体水平高、免疫保护效率高以及生物安全性更优等优点，有利于PEDV防控和净化。

公开(公告)号：CN117987595A

公开(公告)日：2024-05-07

申请号：CN202410068502.1

申请日：2024-01-17

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心

Inventor： 刘定祥 ,  郜婷 ,  刘思颖

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种基于CRISPR Cas12a检测非洲猪瘟病毒的体系，所述基于CRISPR Cas12a检测非洲猪瘟病毒的体系包含Cas12a蛋白和crRNA，所述crRNA通过靶标序列PAM序列后的20‑23bp的靶点序列设计得到，所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述靶标序列为LAMP引物组扩增得到的扩增产物序列，所述LAMP引物组是针对ASFV衣壳蛋白VP72编码基因设计得到的，此外本申请还公开了一种基于CRISPR Cas12a检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及基于CRISPR Cas12a检测非洲猪瘟病毒的体系的构建方法。

公开(公告)号：CN116286885A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202210900601.2

申请日：2022-07-28

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 陈瑞爱 ,  熊挺 ,  刘定祥

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N7/00 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种鸡传染性支气管炎KC疫苗毒株及其制备方法、疫苗，涉及生物工程技术领域。具体的，本发明基于特定的引物，以Beaudette‑p65为骨架，将Beaudette(S1)编码区的第297‑532位氨基酸替换成QX型流行毒KC毒株的S1，其他序列保持不变。成功拯救出重组病毒rIBV‑Beau‑KC(S1)。通过连续在SPF鸡胚和Vero细胞上传代，获得1株具有Vero细胞适应性的重组毒株rIBV‑Beau‑KC(S1)‑p10V9，EID50和TCID50分别为106.78/mL和105.23/mL，与母本毒相似增殖能力。

公开(公告)号：CN119643856A

公开(公告)日：2025-03-18

申请号：CN202411533409.X

申请日：2024-10-31

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  肇庆大华农生物药品有限公司 ,  广东精捷检验检测有限公司

Inventor： 熊挺 ,  陈瑞爱 ,  敬梦瑶 ,  申瀚钦 ,  刘定祥 ,  马光明 ,  张淑琼 ,  李红梅 ,  钟伟锋 ,  高艳

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明提供一种猪流行性腹泻病毒IgG抗体的检测试剂盒及其制备方法和应用，其包括抗原包被板、样品稀释液、浓缩洗涤液、酶标试剂、显色液、终止液、阳性对照以及阴性对照，其中：抗原包被板为包被有PEDV‑S蛋白的酶标板；样品稀释液为含有1％BSA和10％FBS的1×PBST溶液；浓缩洗涤液为20×PBST溶液；酶标试剂为兔抗猪IgG酶标抗体；显色液为TMB单组分溶液；终止液为硫酸溶液。本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、且工艺简单，制造成本低的优点，且能够用于猪流行性腹泻病毒IgG抗体的检测。

公开(公告)号：CN116949093A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202310215818.4

申请日：2023-03-08

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心

Inventor： 刘定祥 ,  刘思颖

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N15/67 ,  C12N15/49 ,  C12N15/50 ,  C12N15/65 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种目的蛋白的表达载体，包括重组载体pXJ40‑TAT和重组载体pXJ40‑TAR。通过构建利用HIV‑1病毒的RNA序列TAR和其转录激活因子TAT，以及猴病毒SV40Ori构建的哺乳动物细胞高效表达载体在真核细胞中表达病毒蛋白的方法，有助于抗原的高效表达，进而开发预防病毒感染的有效疫苗；同时，本发明还公开了目的蛋白的表达方法。

公开(公告)号：CN119286931A

公开(公告)日：2025-01-10

申请号：CN202411223001.2

申请日：2024-09-03

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  李星星 ,  何佳文 ,  陈瑞爱

IPC: C12N15/86 ,  C12N15/66 ,  C12N15/64 ,  C12N15/65 ,  C12N15/69 ,  C12N15/40 ,  C12N15/50 ,  C12N15/45 ,  A61K39/17 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供一种基于塞姆利基森林病毒复制子的高效表达系统的构建方法及应用，该方法包括：构建表达报告基因的saRNA系统；构建得到taRNA系统中复制酶提供质粒；构建得到taRNA系统中抗原提供质粒；将pSFV‑CMV‑T7‑X、pSFV‑CMV‑T7‑TR‑X和pSFV‑CMV‑T7‑replicase分别线性化后进行体外转录制备mRNA；将制备的mRNA以一定的比例转染至宿主真核细胞中表达，得到抗原蛋白；对抗原蛋白检测，以评估基于SFV复制子的saRNA和taRNA系统的表达效率。本发明提供的基于病毒复制子的自扩增DNA和RNA疫苗不仅能缩短开发周期，且能够高水平表达疫苗抗原。

公开(公告)号：CN116606963A

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202310564455.5

申请日：2023-05-18

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心

Inventor： 刘定祥 ,  刘思颖 ,  陈瑞爱

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物领域，公开了一种基于LAMP和CRISPR‑Cas12a的IBV快速检测方法，包括如下步骤：步骤1：通过LAMP引物组扩增鸡传染性支气管炎病毒的目标序列；步骤2：通过与目标序列匹配的crRNA、报告探针、Cas12a蛋白对目标序列进行二次检测，以判断鸡传染性支气管炎病毒是否存在靶序列；所述LAMP引物组为第一引物组、第二引物组、第三引物组中的至少一种；所述crRNA包括与第一引物组对应的第一crRNA、与第二引物组对应的第二crRNA、与第三引物组对应的第三crRNA。该方法能够针对IBV进行高灵敏、高特异性检测，提高对IBV检测的准确度，而且操作简单、快速、对仪器设备要求低。

公开(公告)号：CN116179583A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202211568799.5

申请日：2022-12-06

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  魏玉琴 ,  冯涛声

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/40

Abstract: 本发明公开了一种基于昆虫病毒FHV RNA1复制子在外源基因扩增中的应用，该应用通过昆虫病毒FHV RNA1复制子的自主复制能力在mRNA水平上进行外源基因的扩增；本发明公开了上述基于昆虫病毒FHV RNA1复制子的质粒系统和该质粒系统的构建方法；本发明还公开了该质粒系统在细胞中表达蛋白的方法和应用，该质粒系统在双酶切后获得克隆载体，与外源基因进行同源重组后，在细胞中表达动物或植物蛋白。