公开(公告)号：CN119220506A

公开(公告)日：2024-12-31

申请号：CN202411243968.7

申请日：2024-09-05

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  古倩儿 ,  胡梓弘 ,  杨蓓 ,  何佳文 ,  陈瑞爱

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/50 ,  A61K39/17 ,  A61K39/215 ,  A61K39/295 ,  A61P31/22 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供一种表达IBV S蛋白的基因VII型NDV重组病毒及其制备方法和应用，该方法包括：在pBR322‑DHN3mF病毒基因组的P基因和M基因之间插入经修饰的S基因，得到重组病毒rDHN3mF‑MH20S1‑IBVS2、rDHN3mF‑H120‑S6P、rDHN3mF‑H120‑S6P‑GSAS中的任一种。本发明通过将适应细胞株的IBV‑P65的S2区域与QX型IBV MH20的S2区域进行替换，拯救出重组病毒rDHN3mF‑MH20S1‑IBVS2；通过将H120‑S蛋白上的第692位、第768位、第772位、第815位、第862位、第863位疏水性氨基酸均突变为脯氨酸拯救出重组病毒rDHN3mF‑H120‑S6P；在突变6个疏水性氨基酸为脯氨酸的基础上，将第533位‑第537位的氨基酸依次突变为甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、丝氨酸后拯救出重组病毒rDHN3mF‑H120‑S6P‑GSAS。将拯救出的三株重组病毒分别感染BHK‑21细胞，经WB验证能检测到S蛋白以及NDV全蛋白的高效表达。

公开(公告)号：CN119286931A

公开(公告)日：2025-01-10

申请号：CN202411223001.2

申请日：2024-09-03

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  李星星 ,  何佳文 ,  陈瑞爱

IPC: C12N15/86 ,  C12N15/66 ,  C12N15/64 ,  C12N15/65 ,  C12N15/69 ,  C12N15/40 ,  C12N15/50 ,  C12N15/45 ,  A61K39/17 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供一种基于塞姆利基森林病毒复制子的高效表达系统的构建方法及应用，该方法包括：构建表达报告基因的saRNA系统；构建得到taRNA系统中复制酶提供质粒；构建得到taRNA系统中抗原提供质粒；将pSFV‑CMV‑T7‑X、pSFV‑CMV‑T7‑TR‑X和pSFV‑CMV‑T7‑replicase分别线性化后进行体外转录制备mRNA；将制备的mRNA以一定的比例转染至宿主真核细胞中表达，得到抗原蛋白；对抗原蛋白检测，以评估基于SFV复制子的saRNA和taRNA系统的表达效率。本发明提供的基于病毒复制子的自扩增DNA和RNA疫苗不仅能缩短开发周期，且能够高水平表达疫苗抗原。