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公开(公告)号：CN114480352B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202210097345.8
申请日：2022-01-26
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN112522173B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN115125247A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210671305.X
申请日：2022-06-14
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N9/56 , C12N1/21 , C12R1/11
摘要： 本发明通过对枯草芽孢杆菌来源的启动子分析改造获得了一种强度提高的新型组合启动子pα2‑α2。本发明还提供包含该组合启动子的表达载体、表达系统。本发明所述组合启动子用于控制基因表达，尤其应用于解淀粉芽孢杆菌代谢工程领域，可将碱性蛋白酶表达活性提高144％，为介导解淀粉芽胞杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，推动碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN112522173A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN112458072B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202011513333.6
申请日：2020-12-21
申请人： 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体及其制备。本发明通过提取克劳氏芽孢杆菌基因组DNA，经PCR扩增得到野生型带有酶原区的碱性蛋白酶基因序列，将扩增得到的野生型碱性蛋白酶基因通过易错PCR进行随机突变，通过高通量筛选后获得了十六个高活力碱性蛋白酶基因。将这十六个突变体基因构建重组载体并在枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌中成功表达，得到产酶活力提高的重组菌株，进一步通过发酵工艺优化获得新型碱性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN112501149B
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN202011513325.1
申请日：2020-12-21
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体及其基因、工程菌、制备方法和应用。本发明通过提取克劳氏芽孢杆菌基因组DNA，经PCR扩增得到野生型碱性蛋白酶基因序列，将扩增得到的野生型碱性蛋白酶基因通过易错PCR进行随机突变，通过高通量筛选后获得了若干个高活力碱性蛋白酶基因，再将这些高活力碱性蛋白酶基因进行DNA改组，通过筛选后获得八个更高活力的碱性蛋白酶突变体基因。将这八个突变体基因构建重组载体并在枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌中成功表达，得到产酶活力提高的重组菌株，进一步通过发酵工艺优化获得新型碱性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN112662654A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202110116007.X
申请日：2021-01-28
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN112458072A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011513333.6
申请日：2020-12-21
申请人： 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体及其制备。本发明通过提取克劳氏芽孢杆菌基因组DNA，经PCR扩增得到野生型带有酶原区的碱性蛋白酶基因序列，将扩增得到的野生型碱性蛋白酶基因通过易错PCR进行随机突变，通过高通量筛选后获得了十六个高活力碱性蛋白酶基因。将这十六个突变体基因构建重组载体并在枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌中成功表达，得到产酶活力提高的重组菌株，进一步通过发酵工艺优化获得新型碱性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN111205354A
公开(公告)日：2020-05-29
申请号：CN202010074786.7
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸-任意氨基酸-丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN112521466B
公开(公告)日：2022-06-17
申请号：CN202011580792.6
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高异源蛋白分泌量的信号肽突变体及其用途，属于基因工程技术领域。本发明中的信号肽突变体是将来源于革兰氏阳性菌Sec途径的信号肽N区的带电荷氨基酸进行定点突变，使N区氨基酸的电荷密度为0.2～0.8之间；对所述信号肽H区进行突变，使H区的氨基酸疏水性在0～70之间；对所述信号肽C区的氨基酸进行定点突变，使C区最后三位氨基酸突变为丙氨酸‑任意氨基酸‑丙氨酸。本发明可以有效提高异源蛋白在微生物宿主中的分泌量，有效推动了目的蛋白的高效表达及工业化生产。
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