公开(公告)号：CN111153968B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN202010074806.0

申请日：2020-01-22

申请人： 天津科技大学 ,  山东隆科特酶制剂有限公司

发明人： 路福平 ,  李玉 ,  彭冲 ,  陈雪佳 ,  王兴吉 ,  刘逸寒 ,  王克芬 ,  张会图 ,  刘文龙 ,  刘夫锋 ,  张杰 ,  佟新伟

IPC分类号： C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N9/56 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开了一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述突变体是将来源于芽孢杆菌的Sec途径的信号肽的C端第‑1位和/或第‑3位氨基酸突变为丙氨酸,即将C端的最后三位氨基酸序列突变为AXA或者在信号肽C端后增加氨基酸序列AXA，所述X为任意氨基酸。本发明构建方法简单易行，适用于枯草芽孢杆菌系统，信号肽突变后的碱性蛋白酶表达量均高于未突变体。本发明为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，有效推动了碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。

公开(公告)号：CN111153968A

公开(公告)日：2020-05-15

申请号：CN202010074806.0

申请日：2020-01-22

申请人： 天津科技大学 ,  山东隆科特酶制剂有限公司

发明人： 路福平 ,  李玉 ,  彭冲 ,  陈雪佳 ,  王兴吉 ,  刘逸寒 ,  王克芬 ,  张会图 ,  刘文龙 ,  刘夫锋 ,  张杰 ,  佟新伟

IPC分类号： C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N9/56 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开了一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述突变体是将来源于芽孢杆菌的Sec途径的信号肽的C端第-1位和/或第-3位氨基酸突变为丙氨酸,即将C端的最后三位氨基酸序列突变为AXA或者在信号肽C端后增加氨基酸序列AXA，所述X为任意氨基酸。本发明构建方法简单易行，适用于枯草芽孢杆菌系统，信号肽突变后的碱性蛋白酶表达量均高于未突变体。本发明为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，有效推动了碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。

公开(公告)号：CN112522173B

公开(公告)日：2023-06-16

申请号：CN202011539757.X

申请日：2020-12-23

申请人： 天津科技大学 ,  山东隆科特酶制剂有限公司

发明人： 路福平 ,  李玉 ,  刘逸寒 ,  陈雪佳 ,  王茂军 ,  王兴吉 ,  李庆刚 ,  王克芬 ,  刘文龙 ,  刘夫锋 ,  张杰 ,  佟新伟

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N15/57 ,  C12N15/75 ,  C12R1/07

摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。

公开(公告)号：CN112522173A

公开(公告)日：2021-03-19

申请号：CN202011539757.X

申请日：2020-12-23

申请人： 天津科技大学 ,  山东隆科特酶制剂有限公司

发明人： 路福平 ,  李玉 ,  刘逸寒 ,  陈雪佳 ,  王茂军 ,  王兴吉 ,  李庆刚 ,  王克芬 ,  刘文龙 ,  刘夫锋 ,  张杰 ,  佟新伟

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N9/54 ,  C12N15/57 ,  C12N15/75 ,  C12R1/07

摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。