一种重组乳酸乳球菌菌株的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN118812728A

    公开(公告)日:2024-10-22

    申请号:CN202411068772.9

    申请日:2024-08-06

    摘要: 本发明公开了一种重组乳酸乳球菌菌株的制备方法及其应用,属于基因工程技术领域。本发明构建了表达新型鹅细小病毒融合蛋白的乳酸乳球菌菌株,该菌株可将融合蛋白高效固定在重组乳酸乳球菌表面,无需诱导即可稳定表达。本发明利用VP2的抗原表位(VP2‑1、VP2‑2、VP2‑3)串联构建了VP2‑123,VP2‑123的免疫原性与使用全长序列VP2接近,使用其构建重组菌有效阻止了NGPV的病毒增殖,并且VP2‑123长度有所降低,基因复制效率得到了提升,减少了蛋白表达过程中的出错概率,降低了生产过程中原料的使用量和成本。本发明将重组乳酸乳球菌微生态制剂用于口服免疫,促使机体产生保护性抗体,降低鸭群死亡率。

    鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用

    公开(公告)号:CN117904200A

    公开(公告)日:2024-04-19

    申请号:CN202410023258.7

    申请日:2024-01-08

    摘要: 本发明公开了鸭甲肝病毒1型感染诱导细胞焦亡的分子机制的应用,属于生物医学技术领域。针对DHAV‑1感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后诱导细胞焦亡,引发鸭病毒性肝炎的具体分子机制问题,本发明通过一系列研究发现,DHAV‑1感染DEF细胞引发了细胞焦亡,且通过其2A2蛋白与鸭MAVS蛋白的互作,促进了鸭MAVS蛋白和NLRP3蛋白的相互作用,进而激活caspase‑3,活化的caspase‑3一方面切割GSDME启动细胞焦亡,另一方面促进炎性细胞因子IL‑1β和IL‑18的分泌,引发炎症反应。本研究的开展能够丰富DHAV‑1感染引起免疫损伤的理论基础,也可以为DVH的防治提供新思路和靶点,对禽类细胞焦亡的研究提供参考。

    1型和3型鸭甲肝病毒共有的中和性模拟抗原表位及其应用

    公开(公告)号:CN111454337B

    公开(公告)日:2021-08-13

    申请号:CN202010142423.2

    申请日:2020-03-04

    发明人: 姜世金 张瑞华

    摘要: 本发明公开了一种1型和3型鸭甲肝病毒共有的中和性模拟抗原表位及其应用,属于基因工程表位疫苗技术领域。本发明对1型和3型鸭甲肝病毒的抗原表位进行了深入研究,得到了一组1型和3型鸭甲肝病毒共有的中和性模拟抗原表位。利用本发明的中和性模拟抗原表位可以制备对1型和3型鸭甲肝病毒进行预防和治疗的疫苗。实验发现,以本发明的中和性模拟抗原表位为基础制备的表位疫苗免疫雏鸭后,可提供80%以上的保护率,有效保护雏鸭免受1型鸭甲肝病毒和3型鸭甲肝病毒感染。该表位疫苗减少了普通疫苗的毒副作用,提高了安全性,增强了免疫针对性,也有助于更好地认识鸭甲肝病毒在进入机体后感染和免疫的机制。

    一种特异性识别1型鸭甲肝病毒的纳米抗体

    公开(公告)号:CN109021099B

    公开(公告)日:2020-05-05

    申请号:CN201810945485.X

    申请日:2018-08-20

    摘要: 本发明公开了一种特异性识别1型鸭甲肝病毒的纳米抗体,所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的纳米抗体的分子质量小、稳定性强、抗原结合性能优异、易表达,为1型鸭甲肝病毒的检测和治疗药物的开发提供了基础。以本发明所提供的纳米抗体作为前体,通过随机或定点突变技术进行改造,能够获得亲和性、特异性、稳定性等更好的突变体,用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。

    一种特异性识别1型鸭甲肝病毒的纳米抗体

    公开(公告)号:CN109021099A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201810945485.X

    申请日:2018-08-20

    摘要: 本发明公开了一种特异性识别1型鸭甲肝病毒的纳米抗体,所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的纳米抗体的分子质量小、稳定性强、抗原结合性能优异、易表达,为1型鸭甲肝病毒的检测和治疗药物的开发提供了基础。以本发明所提供的纳米抗体作为前体,通过随机或定点突变技术进行改造,能够获得亲和性、特异性、稳定性等更好的突变体,用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。

    一种快速鉴定鸭圆环病毒基因型的双重PCR方法

    公开(公告)号:CN104059998B

    公开(公告)日:2016-06-01

    申请号:CN201410323308.X

    申请日:2014-07-08

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明提供了一种快速鉴定鸭圆环病毒基因型的双重PCR方法,通过对参考GenBank上已发表的DuCV-1和DuCV-2的序列进行比对,选择在DuCV-1和DuCV-2的保守区分别设计一对针对DuCV的通用特异性引物SEQ1/SEQ2,1型鸭圆环病毒特异性引物SEQ3和2型鸭圆环病毒特异性引物SEQ4;本发明主要是设计并筛选了新的特异性引物,优化了反应过程中的各种参数,利用本组引物建立的针对鸭圆环病毒的双重PCR分型方法特异性强、敏感性更高,可以快速准确地进行DuCV-1和DuCV-2的鉴定。

    一种重组乳酸乳球菌菌株、构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN117660276A

    公开(公告)日:2024-03-08

    申请号:CN202311545168.6

    申请日:2023-11-20

    摘要: 本发明涉及分子生物技术、微生物领域,具体是一种重组乳酸乳球菌菌株、构建方法及其应用,以解决目前商业化的疫苗在疫病防控方面存在病原变异、弱毒活疫苗免疫失败等缺陷。该菌株包含1型及3型鸭甲肝病毒VP1基因的融合基因,融合基因是通过质粒载体导入乳酸乳球,融合基因具有由SEQ No.1所示DNA序列。实验结果表明表达1型及3型鸭甲肝病毒VP1融合蛋白的乳酸乳球菌对DHAV‑1单感染、DHAV‑3单感染、DHAV‑1和DHAV‑3混感染的雏鸭均有良好的免疫保护作用。

    一种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法

    公开(公告)号:CN105821163A

    公开(公告)日:2016-08-03

    申请号:CN201610408646.2

    申请日:2016-06-07

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/68

    摘要: 本发明涉及一种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法,主要是设计并筛选了新的特异性引物,优化了反应过程中的各种参数,利用本组引物建立的针对鹅细小病与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法特异性强、敏感性高,可以快速准确地进行鹅细小病毒和新型樱桃谷鸭源细小病毒的鉴定。本发明建立的双重PCR方法重复性好、可信度高,同时又价格低廉、操作相对简单,适用于大规模流行病学调查。本发明经过1500份样品的检测证明具有很好的可信度,并且只需要普通PCR仪即可进行,由于引物合成价格已经非常便宜,本发明反应成本与普通PCR反应相差无几,实验操作也相对简单,适用于目前我国的畜牧业生产实际。

    一种1型鸭甲肝病毒DNA-Launched感染性克隆的构建方法

    公开(公告)号:CN104593412A

    公开(公告)日:2015-05-06

    申请号:CN201410797305.X

    申请日:2014-12-19

    摘要: 本发明涉及一种1型鸭甲肝病毒DNA-Launched感染性克隆的构建方法。是通过PCR方法在1型鸭甲肝病毒核酸序列的5′端和3′端分别添加了具有自我剪切性质的核酶序列hammerhead ribozyme(ACA TCA TCT GAT GAG TCC GTG AGG ACG AAA CGG TAC CCG GTA CCG TCA T)和hepatitis delta virus ribozyme(GTC CCA TTC GCC ATT ACC GAG GGG ACG GTC CCC TCG GAA TGT TGC CCA GCC GGC GCC AGC GAG GAG GCT GGG ACC ATG CCG GCC)。该重组质粒可以直接转染细胞,转录出两端带有核酶序列的mRNA。上述核酶序列在Mg2+存在的条件下,可以实现自我剪切,故可得到病毒mRNA。本发明是一种操作简便、高效、节约的感染性克隆构建方法。

    一种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法

    公开(公告)号:CN105821163B

    公开(公告)日:2019-01-25

    申请号:CN201610408646.2

    申请日:2016-06-07

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/686

    摘要: 本发明涉及种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法,主要是设计并筛选了新的特异性引物,优化了反应过程中的各种参数,利用本组引物建立的针对鹅细小病与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法特异性强、敏感性高,可以快速准确地进行鹅细小病毒和新型樱桃谷鸭源细小病毒的鉴定。本发明建立的双重PCR方法重复性好、可信度高,同时又价格低廉、操作相对简单,适用于大规模流行病学调查。本发明经过1500份样品的检测证明具有很好的可信度,并且只需要普通PCR仪即可进行,由于引物合成价格已经非常便宜,本专利反应成本与普通PCR反应相差无几,实验操作也相对简单,适用于目前我国的畜牧业生产实际。