公开(公告)号：CN118638877A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410631564.9

申请日：2024-05-21

申请人： 安徽工程大学

发明人： 王天文 ,  方天志 ,  李丹丹 ,  刘庆涛 ,  邵雅萍 ,  黄祖帆 ,  薛正莲

IPC分类号： C12P17/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70

摘要： 本发明涉及合成生物学和基因工程学技术领域，具体涉及一种优化依克多因生物合成途径中基因剂量的方法。本发明首先利用重组蛋白表达技术将构成依克多因合成途径的基因进行单独表达并获得相应的酶；然后利用表达出的酶进行体外生物合成途径重构；通过调整重构时使用的各酶剂量，形成不同的组合；通过分析这些组合对目标产物依克多因形成的影响，确定各酶间合适的计量关系；以此为依据，设计与组装这些基因并用于体内依克多因合成途径的构建，从而获得可以重组质粒或基因组整合形式构建的异源生物合成依克多因途径，且这些基因的产物以能支持高水平合成依克多因的优化剂量存在。本发明提供的方法，可以实现对异源生物合成依克多因途径的理性化重构。

公开(公告)号：CN118345070A

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202410574087.7

申请日：2024-05-10

申请人： 安徽工程大学

发明人： 王天文 ,  方天志 ,  邵雅萍 ,  薛正莲

IPC分类号： C12N15/10 ,  C12P19/34 ,  C12N15/64

摘要： 本发明公开了一种用于多个基因片段组装的试剂及其组装方法，具体涉及基因工程学技术领域，该试剂包括原料和缓冲液体系，所述原料包括T5DNA外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶以及dNTP，所述缓冲液体系为使原料共同发挥作用的混合缓冲液。将购买或配制T5exo、Taq聚合酶、T4连接酶时附带的缓冲液，按照1:2:3的体积比混合获得的混合缓冲液。本发明提供该试剂的配方及组装方法，摆脱对限制性内切酶的依赖，可以将外源片段插入到载体的任意位点，具有很好的通用性，以实现多个基因片段的高效和快速组装，在保证其效率高和操作简便的前提下，该试剂可以使组装过程在更低的温度下进行，进一步降低对实验设备的要求。