公开(公告)号：CN117568363A

公开(公告)日：2024-02-20

申请号：CN202310973827.X

申请日：2023-08-03

Applicant: 宁夏农林科学院动物科学研究所(宁夏草畜工程技术研究中心)

Inventor： 郭亚男 ,  何生虎 ,  杨萌萌 ,  王建东 ,  马科 ,  李勇 ,  梁小军 ,  张小梅 ,  张久盘

IPC: C12N15/31 ,  C07K14/23 ,  C07K1/16 ,  C07K1/14 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种Omp2b蛋白与TrbJ蛋白、制备方法及其应用，编码所述Omp2b蛋白的基因Omp2b基因，编码所述TrbJ蛋白的基因为TrbJ基因，所述Omp2b蛋白和TrbJ蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO1所示，本申请采用含有原核表达载体pet‑28a‑Omp2b、pet28a‑TrbJ质粒的DH5α菌株于含有100μg/mL卡那霉素抗性的LB平板上划线，37℃过夜培养，LB平板生长出单菌落，挑取LB平板生长出的单菌落并接于5mL的LB卡那霉素抗性液体培养基中，于温度为37℃且转速为220r/min的条件下震荡培养过夜，并通过质粒提取试剂盒提取质粒并转化入表达菌BL21中，通过蛋白大量表达、His标签亲和镍柱纯化蛋白得到Omp2b蛋白与TrbJ蛋白；本发明的Omp2b蛋白与TrbJ蛋白并未与其他菌株发生交叉反应，并且具备良好的特异性与敏感性。

公开(公告)号：CN113754744A

公开(公告)日：2021-12-07

申请号：CN202111109156.X

申请日：2021-09-22

Applicant: 宁夏农林科学院动物科学研究所(宁夏草畜工程技术研究中心)

Inventor： 郭亚男 ,  王建东 ,  谢建亮 ,  何生虎 ,  梁小军 ,  李勇

IPC: C07K14/30 ,  C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K1/22 ,  A61K39/02 ,  A61K39/39 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本申请提供一种牛支原体蛋白及其应用。本申请提供一种牛支原体脂膜蛋白家族中牛支原体蛋白(SBP‑2)，编码该蛋白的基因为P48基因，其核苷酸序列如序列表如SEQ ID NO:1所示。所述的牛支原体蛋白SBP‑2，所述牛支原体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请采用原核表达技术构建pET‑28a‑P48重组质粒并导入BL21大肠杆菌，然后筛选IPTG高效表达条件，并利用镍柱亲和层析技术进行SBP‑2蛋白的纯化。结果表明SBP‑2为可溶性膜蛋白其蛋白大小为51KDa。Western blot结果表明原核表达的SBP‑2蛋白具有很好的反应原性。本申请提供一种牛支原体疫苗，该疫苗可以激起犊牛产生明显的特异性免疫反应，并达到很高的抗体水平。

公开(公告)号：CN113754744B

公开(公告)日：2023-06-02

申请号：CN202111109156.X

申请日：2021-09-22

Applicant: 宁夏农林科学院动物科学研究所(宁夏草畜工程技术研究中心)

Inventor： 郭亚男 ,  王建东 ,  谢建亮 ,  何生虎 ,  梁小军 ,  李勇

IPC: C07K14/30 ,  C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K1/22 ,  A61K39/02 ,  A61K39/39 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本申请提供一种牛支原体蛋白及其应用。本申请提供一种牛支原体脂膜蛋白家族中牛支原体蛋白(SBP‑2)，编码该蛋白的基因为P48基因，其核苷酸序列如序列表如SEQ ID NO:1所示。所述的牛支原体蛋白SBP‑2，所述牛支原体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请采用原核表达技术构建pET‑28a‑P48重组质粒并导入BL21大肠杆菌，然后筛选IPTG高效表达条件，并利用镍柱亲和层析技术进行SBP‑2蛋白的纯化。结果表明SBP‑2为可溶性膜蛋白其蛋白大小为51KDa。Western blot结果表明原核表达的SBP‑2蛋白具有很好的反应原性。本申请提供一种牛支原体疫苗，该疫苗可以激起犊牛产生明显的特异性免疫反应，并达到很高的抗体水平。

公开(公告)号：CN115372622A

公开(公告)日：2022-11-22

申请号：CN202210873490.0

申请日：2022-07-21

Applicant: 宁夏农林科学院动物科学研究所(宁夏草畜工程技术研究中心)

Inventor： 郭亚男 ,  何生虎 ,  闫背背 ,  李清利 ,  雷元元 ,  王建东 ,  梁小军

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  G01N33/52 ,  C07K16/12

Abstract: 本申请保护了一种牛支原体SBP‑2胶体金检测试纸，包括样品垫、金标垫、NC膜、吸水垫和PVC胶板。解决了常用牛支原体检测方法使用场景受限的问题，具有快速、高效、便捷等优点，适合临床检测牛支原体使用。本申请还保护了牛支原体SBP‑2胶体金检测试纸中的牛支原体SBP‑2蛋白单克隆抗体的制备方法，利用大肠杆菌中产生的牛支原体SBP‑2蛋白抗原，将阳性小鼠的脾细胞和小鼠脊髓瘤细胞进行细胞融合，制备牛支原体SBP‑2蛋白单克隆抗体。