公开(公告)号：CN1560229A

公开(公告)日：2005-01-05

申请号：CN200410016825.9

申请日：2004-03-09

Applicant: 复旦大学

Inventor： 周佩 ,  冯美卿 ,  史训龙 ,  袁中一

IPC: C12N1/19 ,  C12P21/02 ,  C12P1/02 ,  C12N9/02 ,  C12N15/63 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种制备黄素酶D－氨基酸氧化酶的方法。具体涉及，通过构建重组工程菌株获得高效生产突变D－氨基酸氧化酶的方法。本发明通过基因工程手段改造来源于三角酵母Trigonopsisv viabllis的野生型D－氨基酸氧化酶，将一段Histag融合于野生型酶的N末端和C末端，进而通过亲和层析实现突变酶的高效快速分离。酶在发酵液中的表达水平为4000IU/mL，高于野生型酶，Ni柱亲和层析的回收率为50％。纯化的酶可用于高效氧化转化头孢菌素C－产生戊二酰－7－ACA，与GL－7－ACA酰化酶联用可生产7－ACA。