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公开(公告)号：CN111074004B
公开(公告)日：2023-02-10
申请号：CN202010049859.7
申请日：2020-01-17
Applicant: 复旦大学
Inventor： 周素娟
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6869 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及人类免疫缺陷病毒1型耐药基因型检测法及试剂盒，属于分子生物技术领域。具体而言，本发明提供了用于检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV‑1)耐药基因型的引物组，用来扩增POL基因区的PR区(A区)和RT区(B区+C区)，包括RT‑PCR的引物、巢式PCR第2轮的引物、测序引物。还提供了高效检测HIV‑1耐药基因型的三段RT‑PCR方法以及试剂盒。与现有技术相比，本发明是在常规的in‑house一段法扩增基础上进行大量改进，重新设计引物和更改了相应的扩增反应体系和反应条件，容易掌握，特异性强，灵敏度也提高了很多。本发明的方法能够高效得扩增耐药分析的POL基因序列，这为更全面得耐药分析等提供了更加完善的重要的数据。
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公开(公告)号：CN111074004A
公开(公告)日：2020-04-28
申请号：CN202010049859.7
申请日：2020-01-17
Applicant: 复旦大学
Inventor： 周素娟
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6869 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及人类免疫缺陷病毒1型耐药基因型检测法及试剂盒，属于分子生物技术领域。具体而言，本发明提供了用于检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)耐药基因型的引物组，用来扩增POL基因区的PR区(A区)和RT区(B区+C区)，包括RT-PCR的引物、巢式PCR第2轮的引物、测序引物。还提供了高效检测HIV-1耐药基因型的三段RT-PCR方法以及试剂盒。与现有技术相比，本发明是在常规的in-house一段法扩增基础上进行大量改进，重新设计引物和更改了相应的扩增反应体系和反应条件，容易掌握，特异性强，灵敏度也提高了很多。本发明的方法能够高效得扩增耐药分析的POL基因序列，这为更全面得耐药分析等提供了更加完善的重要的数据。
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公开(公告)号：CN118895391A
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202410988726.4
申请日：2024-07-23
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种一管式多重RPA/RAA‑CRISPR/Cas12a可视化检测HIV‑1DNA、RNA的引物组、试剂盒及其应用。本发明建立了针对HIV‑1DNA、RNA的多重RPA/RAA与CRISPR/Cas12a联合快速检测方法，该方法能够特异性检测到10copies/μL的HIV‑1DNA、RNA，且与其他常见病毒无交叉反应。本方法结合侧向流层析试纸条和蓝光灯或紫外灯在30分内即可肉眼观察并进行定性判断。本发明的多重RPA/RAA核酸扩增产物被crRNA识别后激活Cas12a对ssDNA核酸小分子酶切释放荧光信号被检测，在一管内实现逆转录、扩增、酶切反应，具有防污染的优势。本发明所述的多重RPA/RAA‑CRISPR/Cas12a可视化检测HIV‑1DNA、RNA的方法兼容了国内所有HIV‑1流行毒株亚型，同时具备特异性强、灵敏度高、操作简单快速、可肉眼观察结果、无设备需求的优势，可供偏远基层、学校、机场等地方使用。
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公开(公告)号：CN112322782B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202011043634.7
申请日：2020-09-28
Applicant: 复旦大学
Inventor： 周素娟
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组、试剂盒及方法。检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，加速引物IF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，加速引物IB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明聚合酶螺旋反应针对KSHV使用了4条引物，覆盖5个引物区，相对普通PCR的2条引物特异性更好，可以和巢式PCR的特异性等同。并且本发明通过KSHV基因保守区域的特异性选择，避开疱疹病毒的相似区，能特异性得识别KSHV各个亚型的毒株。通过扩增后的颜色反应就可判断目的基因的存在与否，从而完成了KSHV的定性检测。聚合酶螺旋反应扩增方法的敏感性高于普通PCR。操作简便，快速，对基层现场进行KSHV的检测工作的开展具有很好应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112695110A
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN202011604528.1
申请日：2020-12-29
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6848 , C12Q1/14 , C12N15/11 , C12R1/46
Abstract: 本发明涉及聚合酶螺旋反应快速检测肺炎链球菌核酸的引物组、试剂盒及其应用。引物组或试剂盒至少包括一对检测引物Ft和Bt，推荐加入加速引物IF，检测引物Ft选择Ft‑spn时，检测引物Bt选择Bt‑spn，加速引物IF为IF‑spn，检测引物Ft选择Ft‑cps时，检测引物Bt选择Bt‑cps，加速引物IF为IF‑cps。引物Ft‑spn、Bt‑spn、IF‑spn的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示，引物Ft‑cps、Bt‑cps、IF‑cps的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6所示。扩增反应结束后通过SYBR Green I染料染色，根据颜色是否产生变化就可裸眼观察和判断出目的基因是否存在，从而对样本进行定性检测分析。本发明系首次采用聚合酶螺旋反应检测肺炎链球菌核酸，具有特异性强、灵敏度高、操作简单快速、不依赖大型实验设备等优势。
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公开(公告)号：CN112322782A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011043634.7
申请日：2020-09-28
Applicant: 复旦大学
Inventor： 周素娟
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组、试剂盒及方法。检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，加速引物IF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，加速引物IB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明聚合酶螺旋反应针对KSHV使用了4条引物，覆盖5个引物区，相对普通PCR的2条引物特异性更好，可以和巢式PCR的特异性等同。并且本发明通过KSHV基因保守区域的特异性选择，避开疱疹病毒的相似区，能特异性得识别KSHV各个亚型的毒株。通过扩增后的颜色反应就可判断目的基因的存在与否，从而完成了KSHV的定性检测。聚合酶螺旋反应扩增方法的敏感性高于普通PCR。操作简便，快速，对基层现场进行KSHV的检测工作的开展具有很好应用前景。
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公开(公告)号：CN118086594A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410437577.2
申请日：2024-04-12
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于RPA/RAA恒温扩增反应快速检测HIV‑1RNA或DNA各亚型毒株的通用引物组、试剂盒及其应用与方法，包括由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列组成的针对HIV‑1保守区基因的引物组，基于RPA/RAA恒温扩增法，在同一管体系内20分钟内完成HIV‑1RNA或DNA各亚型毒株的检测，检测限低至101copies/μL。本发明有3种结果呈现方法：当选择直接电泳法时，可根据目的条带位置进行判定；当选择荧光法时，根据荧光曲线是否CT值
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公开(公告)号：CN115261509A
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN202210179475.6
申请日：2022-02-25
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及基于微孔恒温扩增反应检测呼吸道RNA病毒核酸的引物组、试剂盒及其应用，其中包括包埋在不同微孔里的特异性引物组、包含Bst酶和逆转录酶的反应混合液。可以同时检测SARS‑CoV‑1、SARS‑CoV‑2(包括SARS‑CoV‑2‑N和SARS‑CoV‑2‑E)、甲型流感病毒(Inf A)、乙型流感病毒(Influenza B virus，IBV)、呼吸道合胞病毒A(Respiratory syncytial virus A，RSV A)和呼吸道合胞病毒B(Respiratory syncytial virus B，RSV B)这6种呼吸道RNA病毒核酸。与现有技术相比，本发明使用改进的一种每种靶标仅需要4条引物进行恒温扩增的技术，与微孔反应技术相结合，对6种呼吸道RNA病毒核酸进行高通量检测，每组引物靶标单独为一孔，引物之间没有交叉反应，本发明在微孔中进行反应，对样品量和试剂量要求低，经济成本也降低，并且能一次进行多靶标的高通量样本筛查。
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公开(公告)号：CN114807433A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210179487.9
申请日：2022-02-25
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及基于微孔恒温反应检测肠道RNA病毒核酸的引物组、试剂盒及其应用，其中包括包埋在不同微孔里的特异性引物组、包含Bst酶和逆转录酶的反应混合液。可以同时检测诺如病毒GⅠ/GⅡ、甲型肝炎病毒、CA16、EV71这4种肠道RNA病毒核酸。本发明使用改进的每种靶标仅需要2‑4条引物进行的恒温扩增技术，与微孔反应技术相结合，对4种肠道RNA病毒核酸进行高通量检测，每组引物靶标单独为一孔，引物之间没有交叉反应，使用离心的方式使试剂和模板混合物进入包埋有引物组靶标的微孔中。在工艺要求上，相比微流控来说较为简单，通用性很高，检测灵敏度可以达到10个拷贝，降低了加样的复杂性，在临床检测中具有优势。
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