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公开(公告)号：CN110157752A
公开(公告)日：2019-08-23
申请号：CN201810149000.6
申请日：2018-02-13
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明公开了一种用于伯克氏菌目DSM 7029菌株发酵制备天然产物的培养基，除包含酪蛋白胨、酵母粉、六水氯化镁、甘油、乙酸钠、丙酸钠、甲基丙二酸、微量元素溶液和大孔吸附树脂以外，还包含额外添加的碳源组分，碳源组分选自蔗糖、淀粉、糊精、葡萄糖和甘油中的一种或几种，优选的添加量为蔗糖5-50g/L或淀粉5-50g/L或糊精5-50g/L或甘油5-50mL/L或蔗糖加葡萄糖5-50g/L。实验证实，这种组成和优化显著提高了埃博霉素等天然产物的发酵水平，在利用伯克氏菌目DSM 7029菌株进行发酵制备天然产物时具有良好应用前景。
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公开(公告)号：CN102286512A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110181328.4
申请日：2011-06-30
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物工程与合成生物学技术领域，具体为一种基于BT1整合酶及其突变识别位点的多片段DNA串联重组拼装方法。本发明通过突变筛选和验证，提供十六对突变的整合酶识别序列，在此基础上，构建一整套相关载体，包括一个可实现大肠杆菌-天蓝色链霉菌穿梭的骨架载体，以及七个含有突变底物对用于DNA元件构建和筛选的TA克隆载体，并提供多个DNA片段体外串联重组反应的具体方法。本发明方法简单、快速并且高效，可用于多个DNA片段的快速串联重组拼装，通过转化大肠杆菌，实现串联产物的扩增。本方法可广泛用于合成生物学中标准模块和元件的组合与拼装。
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公开(公告)号：CN101967475A
公开(公告)日：2011-02-09
申请号：CN201010197955.2
申请日：2010-06-10
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为一种基于φBT1整合酶及其突变识别位点的基因打靶载体快速构建方法。本发明通过严格突变筛选和验证，提供三对突变的整合酶识别序列，突变的底物对参与反应效率与野生型相当，且在同一体系中表现为不兼容。在此基础上，构建一整套相关载体，包括一个可实现大肠杆菌-天蓝色链霉菌穿梭的骨架载体，以及三个含有突变底物对用于同源臂构建和筛选的TA克隆载体，并提供四个DNA片段体外串联重组反应的具体方法。本发明方法简单、快速并且高效，可用于链霉菌的基因打靶载体的构建；并可通过相应原件替换，广泛用于不同物种基因打靶载体的快速构建。
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公开(公告)号：CN101157906A
公开(公告)日：2008-04-09
申请号：CN200710046170.3
申请日：2007-09-20
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种用于定点整合的蛋白酶Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶及其制备方法，其多克隆抗体及其应用。首先表达纯化Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶蛋白质，该蛋白质保持PhiBT1整合酶的基本特性，但是其可以通过蛋白转导进入高等生物细胞，并增加蛋白向细胞核转移的能力，同时适用于细胞外体系以及活细胞体系中介导特异性附加在attP与attB上的DNA分子之间的交换与转移等基因操作。用Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶蛋白质直接与佐剂相混合，注射免疫动物，制得Phi BT1整合酶多克隆抗体。该抗体可以用于特异性识别Phi BT1整合酶蛋白质。
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公开(公告)号：CN101967475B
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201010197955.2
申请日：2010-06-10
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为一种基于φBT1整合酶及其突变识别位点的基因打靶载体快速构建方法。本发明通过严格突变筛选和验证，提供三对突变的整合酶识别序列，突变的底物对参与反应效率与野生型相当，且在同一体系中表现为不兼容。在此基础上，构建一整套相关载体，包括一个可实现大肠杆菌-天蓝色链霉菌穿梭的骨架载体，以及三个含有突变底物对用于同源臂构建和筛选的TA克隆载体，并提供四个DNA片段体外串联重组反应的具体方法。本发明方法简单、快速并且高效，可用于链霉菌的基因打靶载体的构建；并可通过相应原件替换，广泛用于不同物种基因打靶载体的快速构建。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102154268A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010610631.7
申请日：2010-12-29
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/11 , C12N15/63 , C12N15/113
Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程领域，具体为一种高效的链霉菌微型转座突变系统及其构建方法和应用。本发明基于一种来源于诺卡氏菌Norcardia asteroids YP21的转座因子IS204，构建一系列含有IS204转座系统的转座子pDZY101~pDZY107，鉴定了天蓝色链霉菌中IS204转座酶作用位点的特征，并且证明了该转座系统具有良好的遗传稳定性和转座随机性。利用pDZY101及其衍生质粒对S.coelicolor M145进行转座突变，得到了大量的表型突变株，并且在变铅青链霉菌等其它链霉菌属成员中也发现了类似的特征,这些特点使得该转座系统在研究模式链霉菌功能基因上有着良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN108456703B
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN201710090318.7
申请日：2017-02-20
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明公开了一种异源表达埃博霉素的方法，在宿主菌中引入埃博霉素基因簇，同时补充埃博霉素前体合成途径，结合相关tRNA基因的引入及启动子的插入，能够大幅提高埃博霉素的表达量，产量提高约4个数量级，可达到8.5mg/L。此外，本发明还提供了一种异源表达埃博霉素的基因工程菌株及生产埃博霉素的方法。
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公开(公告)号：CN108456703A
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201710090318.7
申请日：2017-02-20
Applicant: 复旦大学
CPC classification number: C12P17/18 , C12R1/01 , C12R1/645 , C12P17/181 , C12N15/52
Abstract: 本发明公开了一种异源表达埃博霉素的方法，在宿主菌中引入埃博霉素基因簇，同时补充埃博霉素前体合成途径，结合相关tRNA基因的引入及启动子的插入，能够大幅提高埃博霉素的表达量，产量提高约4个数量级，可达到8.5mg/L。此外，本发明还提供了一种异源表达埃博霉素的基因工程菌株及生产埃博霉素的方法。
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公开(公告)号：CN103060362A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201210508069.6
申请日：2012-12-03
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程领域，具体为一种基于位点特异性重组系统实现抗生素生物合成基因簇克隆的方法。本发明是基于链霉菌噬菌体φBT1自身编码的整合酶所介导的位点特异性重组反应，先通过同源重组的方式对抗生素产生菌株进行遗传改造，在靶标基因簇的两端分别插入BAC载体、抗性基因和φBT1整合酶所识别的位点特异性重组位点attB和attP，抽提染色体基因组片段，在φBT1整合酶的作用下于体外使attB和attP位点之间发生位点特异性重组反应，靶标基因簇自身环化，从而实现几十甚至几百kb的大片段抗生素生物合成基因簇的克隆，为生物合成基因簇进一步进行遗传修饰奠定了基础，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN102154268B
公开(公告)日：2012-08-22
申请号：CN201010610631.7
申请日：2010-12-29
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/11 , C12N15/63 , C12N15/113
Abstract: 本发明属于生物技术和基因工程领域，具体为一种高效的链霉菌微型转座突变系统及其构建方法和应用。本发明基于一种来源于诺卡氏菌NorcardiaasteroidsYP21的转座因子IS204，构建一系列含有IS204转座系统的转座子pDZY101~pDZY107，鉴定了天蓝色链霉菌中IS204转座酶作用位点的特征，并且证明了该转座系统具有良好的遗传稳定性和转座随机性。利用pDZY101及其衍生质粒对S.coelicolorM145进行转座突变，得到了大量的表型突变株，并且在变铅青链霉菌等其它链霉菌属成员中也发现了类似的特征,这些特点使得该转座系统在研究模式链霉菌功能基因上有着良好的应用前景。
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