比例型核酸适配体荧光探针及其检测赭曲霉毒素A的方法

    公开(公告)号:CN109444101A

    公开(公告)日:2019-03-08

    申请号:CN201811527437.5

    申请日:2018-12-13

    申请人: 四川大学

    IPC分类号: G01N21/64 C09K11/07

    摘要: 本发明公开了一种利用带标记的核酸适配体和核酸四链体染料构建的荧光比例探针,所述核酸适配体可特异性识别赭曲霉毒素A,即OTA核酸适配体,其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:1所示。本发明所述赭曲霉毒素A检测方法如下:(1)制备OTA核酸适配体-硫黄素T混合反应溶液,即比例型核酸适配体荧光探针溶液;(2)建立定量检测赭曲霉毒素A的标准曲线;(3)实际样品所含赭曲霉毒素A的检测。使用本发明所述的荧光比例探针进行赭曲霉毒素A检测的方法,可以抵抗其他核酸或杂质的干扰,降低传统方法检测一次荧光信号带来的实验误差,过程可控,操作简单,并且灵敏度高,检测限仅为0.38 ng/mL,同时本方法在均相溶液环境中便可进行荧光检测,不需要洗脱分离,在临场快速检测中具有较大的应用潜力和推广价值。

    比例型核酸适配体荧光探针及其检测赭曲霉毒素A的方法

    公开(公告)号:CN109444101B

    公开(公告)日:2021-03-02

    申请号:CN201811527437.5

    申请日:2018-12-13

    申请人: 四川大学

    IPC分类号: G01N21/64 C09K11/07

    摘要: 本发明公开了一种利用带标记的核酸适配体和核酸四链体染料构建的荧光比例探针,所述核酸适配体可特异性识别赭曲霉毒素A,即OTA核酸适配体,其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:1所示。本发明所述赭曲霉毒素A检测方法如下:(1)制备OTA核酸适配体‑硫黄素T混合反应溶液,即比例型核酸适配体荧光探针溶液;(2)建立定量检测赭曲霉毒素A的标准曲线;(3)实际样品所含赭曲霉毒素A的检测。使用本发明所述的荧光比例探针进行赭曲霉毒素A检测的方法,可以抵抗其他核酸或杂质的干扰,降低传统方法检测一次荧光信号带来的实验误差,过程可控,操作简单,并且灵敏度高,检测限仅为0.38 ng/mL,同时本方法在均相溶液环境中便可进行荧光检测,不需要洗脱分离,在临场快速检测中具有较大的应用潜力和推广价值。

    一种快速检测单增李斯特菌的试剂盒及其制备方法和检测方法

    公开(公告)号:CN112553305A

    公开(公告)日:2021-03-26

    申请号:CN202110107000.1

    申请日:2021-01-27

    申请人: 四川大学

    IPC分类号: C12Q1/6816 C12Q1/06

    摘要: 本发明属于食品检测领域,具体公开了一种快速检测单增李斯特菌的试剂盒及其制备方法和检测方法。所述试剂盒包括CRISPR‑Cas检测体系,具体包括:分子识别剂;信号转换剂;转录体系;以及缓冲液。本发明设计了一种CRISPR‑Cas 13直接切割RNA序列以检测单增李斯特菌的方法,利用Cas 13蛋白与crRNA锚定序列结合形成识别元件crRNA‑Cas13复合物,靶标RNA存在时,其与crRNA向导序列结合,激活Cas13的非特异性RNase活性,剪切信号分子,产生荧光淬灭。本发明通过检测目标细菌RNA而非DNA,实现对单增李斯特菌的检测,可避免检测结果出现假阳性造成实际菌落检出数偏高;该方法一步即可直接检测目标RNA,无需进行PCR扩增,简化了操作流程,且可避免非特异性扩增和交叉污染的问题。