抗葡聚糖单链抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN102153651A

    公开(公告)日:2011-08-17

    申请号:CN201110023901.9

    申请日:2011-01-21

    Abstract: 抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。涉及抗葡聚糖的抗体,提供抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。克隆抗葡聚糖单链抗体基因,并将其导入载体,构建重组载体;将重组载体导入宿主细菌,构建表达抗葡聚糖单链抗体的重组工程菌;重组工程菌发酵培养,分离纯化发酵液,即得抗葡聚糖单链抗体。利用抗葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞株D9,通过RT-PCR技术,获得了该抗体的重、轻链可变区序列,进一步组装成抗葡聚糖单链抗体基因,并构建重组表达载体pET-22(b+)-scFv,进行抗葡聚糖单链抗体的表达、纯化与鉴定。在基因工程技术的大背景下,抗葡聚糖单链抗体的获得将有助于未来该抗体的进一步开发和应用。

    抗葡聚糖单链抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN102153651B

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201110023901.9

    申请日:2011-01-21

    Abstract: 抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。涉及抗葡聚糖的抗体,提供抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。克隆抗葡聚糖单链抗体基因,并将其导入载体,构建重组载体;将重组载体导入宿主细菌,构建表达抗葡聚糖单链抗体的重组工程菌;重组工程菌发酵培养,分离纯化发酵液,即得抗葡聚糖单链抗体。利用抗葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞株D9,通过RT-PCR技术,获得了该抗体的重、轻链可变区序列,进一步组装成抗葡聚糖单链抗体基因,并构建重组表达载体pET-22(b+)-scFv,进行抗葡聚糖单链抗体的表达、纯化与鉴定。在基因工程技术的大背景下,抗葡聚糖单链抗体的获得将有助于未来该抗体的进一步开发和应用。

    α-葡聚糖抗原及特异性单克隆抗体的制备方法

    公开(公告)号:CN102127143A

    公开(公告)日:2011-07-20

    申请号:CN201010606983.5

    申请日:2010-12-27

    Abstract: 本发明公开了一种α-葡聚糖抗原及特异性单克隆抗体的制备方法。抗原的制备方法,包括将α-葡聚糖与蛋白混合,用水溶解,调节溶液的pH为5~8,冷冻干燥,研磨成粉;将粉末置于50~60℃的恒温,相对温度为60~90%,至少反应3天,得到α-葡聚糖抗原。抗体的制备方法包括使用制备得到的抗原与佐剂混合,乳化,注射到动物体内;选取血清效价高动物体的脾细胞与瘤细胞融合,得到可分泌抗体的杂交瘤细胞;使用杂交瘤细胞生产或腹水法生产抗体。本发明方法制备的抗原,免疫原性高,可有效地诱导产生免疫反应,获得性能优异的抗体。本发明的抗体,可与α-葡聚糖特异性反应,产生肉眼可见的沉淀,效价高,可用于α-葡聚糖的定量分析。

    抗人神经纤毛蛋白1的单域抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN105237637A

    公开(公告)日:2016-01-13

    申请号:CN201510757571.4

    申请日:2015-11-10

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 抗人神经纤毛蛋白1的单域抗体及其制备方法,属于基因工程和抗体工程技术领域。制备方法:克隆抗人神经纤毛蛋白1单域抗体基因,并将其导入载体,构建重组载体;将重组载体导入宿主细菌,构建表达抗人神经纤毛蛋白1单域抗体的重组工程菌;将重组工程菌发酵培养,分离纯化发酵液,即得抗人神经纤毛蛋白1单域抗体。以抗人神经纤毛蛋白1单克隆抗体杂交瘤细胞株A6为模板,RT-PCR克隆获取该抗体的重链可变区基因(VH);将其导入质粒载体pET-22b(+),构建重组载体pET-22b(+)-VH;将重组载体导入表达菌株E.coli BL21(DE3),IPTG诱导人神经纤毛蛋白蛋白1单域抗体的表达,然后纯化与鉴定。

    一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法

    公开(公告)号:CN105137084B

    公开(公告)日:2016-09-28

    申请号:CN201510513781.9

    申请日:2015-08-20

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法,涉及葡聚糖。1)酶标反应板的包被;2)酶标反应板的封闭;3)加检测样品;4)加酶标二抗;5)加底物显色;6)终止反应;7)OD值的测定。杂交瘤细胞株D9保藏编号为CCTCC NO:C2010107。基于抗葡聚糖单克隆抗体建立的夹心酶联免疫吸附测定方法,可定量检测样本中的葡聚糖,具有特异性强、灵敏度高、快速简便易于操作、对仪器的要求低等优点,更能适应大规模样品检测的需要。

    肿瘤血管靶向多肽与组织因子的融合蛋白及其制备方法

    公开(公告)号:CN102153653B

    公开(公告)日:2012-08-15

    申请号:CN201010616867.1

    申请日:2010-12-30

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 肿瘤血管靶向多肽与组织因子的融合蛋白及其制备方法。涉及重组融合蛋白的表达与纯化,提供肿瘤血管靶向多肽与组织因子的融合蛋白及其制备方法与应用。制备方法包括:设计引物,PCR扩增EG3287-tTF重组基因,并将其导入载体,将重组载体导入宿主细胞,构建表达融合蛋白EG3287-tTF的重组工程菌,发酵培养,分离纯化发酵液,即得肿瘤血管靶向多肽与组织因子的融合蛋白。构建了靶向性抗肿瘤融合蛋白EG3287-tTF,获得一种既具有tTF抗肿瘤的优点,又具有靶向性的新型tTF衍生物,并增强tTF的抗肿瘤效果,为开发肿瘤血管靶向治疗的新药物奠定了基础。

    抗人神经菌毛素1单克隆抗体的制备方法

    公开(公告)号:CN102161703A

    公开(公告)日:2011-08-24

    申请号:CN201010618397.2

    申请日:2010-12-30

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 抗人神经菌毛素1单克隆抗体的制备方法。涉及单克隆抗体,提供抗人神经菌毛素1单克隆抗体的制备方法。包括:克隆人神经菌毛素1的b1b2结构域基因序列,并将其导入载体,构建重组载体,并将其转化到宿主细菌中进行发酵培养,分离纯化发酵液即得NRP1/b1b2蛋白;用NRP1/b1b2蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;筛选融合后的细胞,获得可分泌抗人神经菌毛素1单克隆抗体的杂交瘤细胞,即得抗人神经菌毛素1单克隆抗体。所得抗人神经菌毛素1单克隆抗体灵敏性高、特异性强。

    一种肿瘤血管靶向磁纳米促凝血蛋白的制备方法

    公开(公告)号:CN110437338A

    公开(公告)日:2019-11-12

    申请号:CN201910729859.9

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种肿瘤血管靶向磁纳米促凝血蛋白的制备方法,涉及促凝血蛋白。制备方法:融合蛋白tTF-EG3287的表达、纯化和复性;用共沉淀方法制备纳米Fe3O4,再制备表面改性磁性纳米颗粒Fe3O4-NH2,接着制备羧甲基壳聚糖包裹的Fe3O4磁性纳米载体CMC/Fe3O4,最后制备磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe3O4。对磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe3O4表征。通过共聚焦显微镜观察和FXa活化实验考察磁纳米促凝血蛋白的靶向能力和促凝血活性。体外实验证实,磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe3O4具有NRP-1靶向性和促凝血活性。

    抗人神经纤毛蛋白1的单域抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN105237637B

    公开(公告)日:2018-10-30

    申请号:CN201510757571.4

    申请日:2015-11-10

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 抗人神经纤毛蛋白1的单域抗体及其制备方法,属于基因工程和抗体工程技术领域。制备方法:克隆抗人神经纤毛蛋白1单域抗体基因,并将其导入载体,构建重组载体;将重组载体导入宿主细菌,构建表达抗人神经纤毛蛋白1单域抗体的重组工程菌;将重组工程菌发酵培养,分离纯化发酵液,即得抗人神经纤毛蛋白1单域抗体。以抗人神经纤毛蛋白1单克隆抗体杂交瘤细胞株A6为模板,RT‑PCR克隆获取该抗体的重链可变区基因(VH);将其导入质粒载体pET‑22b(+),构建重组载体pET‑22b(+)‑VH;将重组载体导入表达菌株E.coli BL21(DE3),IPTG诱导人神经纤毛蛋白蛋白1单域抗体的表达,然后纯化与鉴定。

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