一种原位分离与固定依赖NADH和NADPH的耐盐氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN110272893B

    公开(公告)日:2021-03-30

    申请号:CN201910586963.7

    申请日:2019-07-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 王世珍 霍鹤宇

    Abstract: 本发明公开了一种原位分离与固定依赖NADH和NADPH的耐盐氧化还原酶的方法。本发明在氧化石墨烯接枝上聚乙烯亚胺(PEI)后,由于PEI可提高氧化还原酶的稳定性,并可作为诱导生物矿化的模版。本发明中的温和固定化条件使得酶分子的天然构象和生物活性得到很好的保持,且固定化酶具有较高的机械强度。本发明利用PEI接枝的碳纳米材料对来源于海洋菌株的粗酶液进行不同盐浓度下的吸附和洗脱,发展从粗酶液中分离耐盐氧化还原酶并进行原位固定化的方法,可排除假阴性、假阳性的干扰,提高新酶筛选效率,并实现酶库有效构建,充分挖掘微生物的酶资源。

    一种氨基酸脱氢酶及其应用

    公开(公告)号:CN110607289A

    公开(公告)日:2019-12-24

    申请号:CN201910820939.5

    申请日:2019-08-30

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种氨基酸脱氢酶及其应用,对如SEQ ID NO.01所示的氨基酸脱氢酶进行突变而获得,上述突变包括如下至少之一:将第57位的L突变为E、第60位的G突变为S或T、将第76位的K突变为S、将第285位的Y突变为L或M、将第288位的N突变为E和将第333位的M突变为D或R。本发明通过对获得自海洋菌株Bacillus nanhaiensis的苯丙氨酸脱氢酶的分子改造,使其底物结合口袋发生了重塑,不仅可以容纳这些大位阻底物,同时拉近了底物与辅酶之间的距离,使其获得对大位阻底物的催化活性,拓展了其催化功能用于生物合成系列具有大位阻疏水侧链的非天然氨基酸。

    一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法

    公开(公告)号:CN105567756B

    公开(公告)日:2019-06-14

    申请号:CN201610069548.0

    申请日:2016-02-01

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法,属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到来源于海洋的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica),在加入底物酮、氨基供体和辅助底物情况下,利用该菌株的全细胞及粗酶液催化酮不对称还原胺化制备手性胺。本发明确定了该菌株全细胞催化和粗酶液催化的不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明在生物催化制备手性胺领域具有较好的工业应用前景,对于今后海洋新型生物催化剂的开发和手性胺的绿色合成方法的研究具有重要意义。

    一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法

    公开(公告)号:CN105567756A

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201610069548.0

    申请日:2016-02-01

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12P13/001

    Abstract: 本发明公开了一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法,属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到来源于海洋的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica),在加入底物酮、氨基供体和辅助底物情况下,利用该菌株的全细胞及粗酶液催化酮不对称还原胺化制备手性胺。本发明确定了该菌株全细胞催化和粗酶液催化的不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明在生物催化制备手性胺领域具有较好的工业应用前景,对于今后海洋新型生物催化剂的开发和手性胺的绿色合成方法的研究具有重要意义。

    一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用

    公开(公告)号:CN102965323A

    公开(公告)日:2013-03-13

    申请号:CN201210568673.8

    申请日:2012-12-24

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用,涉及1,3-丙二醇。提供丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Gen160以及利用废甘油生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用。步骤为取采集样品加入到白菜汁中,富集培养后置水浴,杀死非芽孢菌,转入梭菌增殖液体培养基,厌氧培养再置水浴,转入发酵培养基,厌氧选择性富集培养后进行高效液相色谱分析发酵产物,选取能生产1,3-丙二醇的阳性菌;采用高层琼脂柱法分离出单菌落;进行好氧和厌氧培养,除去兼性厌氧菌,得到严格厌氧菌,分析发酵产物,选取能够生产1,3-丙二醇和培养特征、菌落形态均符合丁酸梭菌培养特征的菌株进行16S rDNA序列分析鉴定。

    一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN102703574A

    公开(公告)日:2012-10-03

    申请号:CN201210190270.4

    申请日:2012-06-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,涉及一种氧化还原酶。提供一种效率较高、可增大发现有实际应用价值酶的概率,以克服现有的筛选手段实用性不高、资源浪费较大、效率较低等缺陷的筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,所述辅酶依赖型氧化还原酶包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖型氧化还原酶。建立NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶库;对所述氧化还原酶,依据其反应条件进行分类;对每一类氧化还原酶通过实验统一其反应条件,建立对应的氧化还原酶系的检测平台;建立菌株库;利用检测平台对菌株库进行高通量酶活检测,筛选得NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶。

    一种原位分离与固定依赖NADH和NADPH的耐盐氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN110272893A

    公开(公告)日:2019-09-24

    申请号:CN201910586963.7

    申请日:2019-07-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 王世珍 霍鹤宇

    Abstract: 本发明公开了一种原位分离与固定依赖NADH和NADPH的耐盐氧化还原酶的方法。本发明在氧化石墨烯接枝上聚乙烯亚胺(PEI)后,由于PEI可提高氧化还原酶的稳定性,并可作为诱导生物矿化的模版。本发明中的温和固定化条件使得酶分子的天然构象和生物活性得到很好的保持,且固定化酶具有较高的机械强度。本发明利用PEI接枝的碳纳米材料对来源于海洋菌株的粗酶液进行不同盐浓度下的吸附和洗脱,发展从粗酶液中分离耐盐氧化还原酶并进行原位固定化的方法,可排除假阴性、假阳性的干扰,提高新酶筛选效率,并实现酶库有效构建,充分挖掘微生物的酶资源。

    一种还原氧化石墨烯固定化苯丙氨酸脱氢酶的方法

    公开(公告)号:CN109456960A

    公开(公告)日:2019-03-12

    申请号:CN201811621173.X

    申请日:2018-12-28

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用还原氧化石墨烯固定化苯丙氨酸脱氢酶的方法,属于固定化酶技术领域。还原氧化石墨烯的结构稳定,生物相容性好,是一种优良的酶固定化载体。片层结构的还原氧化石墨烯表面缺少环氧基、羰基、羧基等基团,负载面积大且具疏水性。还原氧化石墨烯固定化苯丙氨酸脱氢酶主要为疏水作用,在固定化过程中,还原氧化石墨烯的还原程度和盐浓度对还原氧化石墨烯固定化酶具有影响。所得固定化苯丙氨酸脱氢酶的pH稳定性和重复使用稳定性明显增强,同时具有较高的酶活性回收率。本发明的优点在于工艺简单、制备条件温和、固定化率高。

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