一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体及构建方法

    公开(公告)号:CN102816794A

    公开(公告)日:2012-12-12

    申请号:CN201210302034.7

    申请日:2012-08-23

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明公开了一种鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体及构建方法。其构建流程是设计引物分别将编码小鼠EBI3氨基酸1-228的cDNA序列与编码小鼠p28氨基酸29-234的cDNA序列扩增,然后通过SOEPCR的方法获得整合的DNA片段。将此片段与pcDNA3.1+载体连接后得到鼠源IL-27重组蛋白真核表达载体pSZ12。其中EBI3和p28通过预先设计的氨基酸编码序列连接。本发明所构建的载体,不仅能高效表达由EBI3和p28组成的异源二聚体IL-27,而且包含6×组氨酸编码序列,极大方便了重组蛋白的纯化。并且可将其关键片段克隆至其他载体上以方便不同情况下的蛋白表达应用,为研究IL-27功能及基因治疗方法的研究提供了一个有效工具。

    新型树枝状化合物为载体的抗乳腺癌Her2疫苗

    公开(公告)号:CN103191423A

    公开(公告)日:2013-07-10

    申请号:CN201210001162.8

    申请日:2012-01-04

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 洪章勇 尹芝南

    Abstract: 本发明公开了新型抗乳腺癌多肽疫苗的研制方法,其特征包括将HER2/neu 342-350多肽和E75多肽等抗原肽连接到树枝状化合物(dendrimer)的表面,通过提高疫苗的分子量来提高其免疫原性;同时将能高效诱导体内免疫反应的Toll样受体(TLR)的配基和刺激CD4+Th细胞增殖的抗原(Th抗原),一起连接到树枝状化合物的表面,来进一步增强疫苗的免疫原性。

    报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选方法的建立

    公开(公告)号:CN101851657A

    公开(公告)日:2010-10-06

    申请号:CN201010138847.8

    申请日:2010-04-06

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一种荧光报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型及药物筛选方法,以及利用4get(IL-4/GFP-enhanced transcript)小鼠筛选治疗哮喘病药物的具体方法,包括T细胞体外培养分化、同时刻药物高通量筛选及流式细胞仪检测。本发明中的T细胞体外培养分化与药物筛选分别涉及免疫学与化学生物学领域,应用特有的荧光报告基因小鼠在T细胞分化过程中可指示特定细胞因子的产生,具备高通量筛选小分子药物及天然产物提取物的能力。基于该模型的药物筛选平台可用于筛选新药,以及开发一批对机体免疫反应和对T细胞分化、重要细胞因子分泌具有调控作用的药物。

    一种条件性基因敲除载体的构建方法

    公开(公告)号:CN101693902A

    公开(公告)日:2010-04-14

    申请号:CN200910070819.4

    申请日:2009-10-16

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤:设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物,并PCR扩增出L、R和M,经过三次线性化载体,体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组,转化感受态的步骤,完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间,且阳性克隆率极高,适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建,而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作,同时还可用于基因敲入载体的构建。

    新型可降解聚合物为载体的抗乳腺癌Her2疫苗

    公开(公告)号:CN103191419A

    公开(公告)日:2013-07-10

    申请号:CN201210001163.2

    申请日:2012-01-04

    Applicant: 南开大学

    Inventor: 洪章勇 尹芝南

    Abstract: 本发明公开了新型抗乳腺癌多肽疫苗的研制方法,其特征包括将HER2/neu 342-350多肽和E75多肽囊缩到聚乳酸-羟基乙酸共聚物形成的纳米颗粒中,形成大小约500纳米到2微米之间的纳米疫苗。这样的疫苗能高效的被抗原递呈细胞(包括巨噬细胞和树突状细胞)摄取,从而能显著提高her2抗原肽的免疫原性。我们通过纳米技术对Her2抗原肽进行处理,将其囊缩到纳米大小的由可降解聚合物PLGA制成的纳米颗粒中。该纳米疫苗在体内能被抗原递呈细胞巨噬细胞和树突状细胞高效摄取,具有很强的免疫原性,且PLGA可降解聚合物作为FDA批准的药用辅料,在体内可以完全降解,无毒性。该纳米疫苗制备简单,物理性质稳定,免疫原性高,可同时刺激体液免疫和细胞免疫,是理想的抗乳腺癌的Her2疫苗。

    新型抗乳腺癌多肽疫苗
    9.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102475886A

    公开(公告)日:2012-05-30

    申请号:CN201010561547.0

    申请日:2010-11-29

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 本发明公开了新型抗乳腺癌多肽疫苗的研制方法,其特征在于包括一个来源于HER2/neu(表皮生长因子受体)的多肽片段(E75或342-350肽段),一个效应T细胞(Th,T辅助细胞)抗原决定基,和一个TLR(toll-like receptor,toll样细胞受体)的配基,连接这三组分的半胱氨酸。这些TLR的配基可以结合到树突状细胞表面的某些TLR上,促进了树状细胞的成熟和炎症因子的释放,也增强了树突状细胞对衍生多肽的吞噬和递呈;第二部分由Th抗原决定基组成,抗体产生的过程中需要CD4+Th细胞的参与,递呈细胞(APC)将抗原递呈到细胞表面的MHC上,需要激活CD4+Th细胞,才能引起细胞免疫过程;第三部分是多肽片段,它是由HER2/neu蛋白衍生出的肽链(E75或342-350),可有效诱导体液免疫,当其与免疫辅助物相结合,可以有效地诱导蛋白特异性免疫应答。

    一种条件性基因敲除载体的构建方法

    公开(公告)号:CN101693902B

    公开(公告)日:2011-06-08

    申请号:CN200910070819.4

    申请日:2009-10-16

    Applicant: 南开大学

    Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤:设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物,并PCR扩增出L、R和M,经过三次线性化载体,体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组,转化感受态的步骤,完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间,且阳性克隆率极高,适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建,而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作,同时还可用于基因敲入载体的构建。

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