公开(公告)号：CN101693902A

公开(公告)日：2010-04-14

申请号：CN200910070819.4

申请日：2009-10-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 尹芝南 ,  王璞玥 ,  赵立青 ,  张松 ,  罗维

IPC: C12N15/85

Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤：设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物，并PCR扩增出L、R和M，经过三次线性化载体，体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组，转化感受态的步骤，完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间，且阳性克隆率极高，适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建，而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作，同时还可用于基因敲入载体的构建。

公开(公告)号：CN101693902B

公开(公告)日：2011-06-08

申请号：CN200910070819.4

申请日：2009-10-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 尹芝南 ,  王璞玥 ,  赵立青 ,  张松 ,  罗维

IPC: C12N15/85

Abstract: 一种高效并且合理的完成条件性基因敲除载体的构建方法。包括如下步骤：设计出包含15bp重组序列的左右同源片段L和R以及要敲除的序列M的引物，并PCR扩增出L、R和M，经过三次线性化载体，体外重组酶(In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit)重组，转化感受态的步骤，完成最终载体的构建工作。本发明极大的节省了构建时间，且阳性克隆率极高，适合长片段的同源臂。此方法不仅可以用于小鼠条件性基因敲除载体的构建，而且可以用于符合此基因敲除原理的其它物种的条件性基因敲除载体构建工作，同时还可用于基因敲入载体的构建。