公开(公告)号：CN107142269A

公开(公告)日：2017-09-08

申请号：CN201710423493.3

申请日：2017-06-07

Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司

Inventor： 黄小罗 ,  王贞贞 ,  张丽华 ,  柳振宇

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

CPC classification number: C07K14/245 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种改造的质粒复制子及其应用。本发明提供的质粒复制子是经典的低拷贝复制子pSC101的RepA蛋白93位谷氨酸突变为脯氨酸的突变体；编码该脯氨酸的密码子为CCG。携带本发明的人工改造的质粒复制子(pSC101‑RepA‑E93P)的质粒，其在大肠杆菌中复制后，在体外抽提的产量约为携带野生型pSC101复制子的质粒的12倍，约为携带CorEI/pMB1/pBR322类型高拷贝复制子的质粒pUC57的2倍。同时，在大肠杆菌中，携带本发明的人工改造的质粒复制子的质粒能够与携带CorEI/pMB1/pBR322类型高拷贝复制子的质粒几乎同等比例地共同复制。

公开(公告)号：CN107142269B

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN201710423493.3

申请日：2017-06-07

Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司

Inventor： 黄小罗 ,  王贞贞 ,  张丽华 ,  柳振宇

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种改造的质粒复制子及其应用。本发明提供的质粒复制子是经典的低拷贝复制子pSC101的RepA蛋白93位谷氨酸突变为脯氨酸的突变体；编码该脯氨酸的密码子为CCG。携带本发明的人工改造的质粒复制子(pSC101‑RepA‑E93P)的质粒，其在大肠杆菌中复制后，在体外抽提的产量约为携带野生型pSC101复制子的质粒的12倍，约为携带CorEI/pMB1/pBR322类型高拷贝复制子的质粒pUC57的2倍。同时，在大肠杆菌中，携带本发明的人工改造的质粒复制子的质粒能够与携带CorEI/pMB1/pBR322类型高拷贝复制子的质粒几乎同等比例地共同复制。

公开(公告)号：CN106480016A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201610864971.X

申请日：2016-09-29

Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司

Inventor： 余鹏飞 ,  王贞贞 ,  曾雪飞 ,  李胜华 ,  徐士军 ,  卢圣东 ,  闵静 ,  吴其根 ,  梁艳

IPC: C12N15/10

CPC classification number: C12N15/1003 ,  C12Q2527/125

Abstract: 本发明公开了一种抽提低拷贝质粒的方法。一种抽提低拷贝质粒的方法，其特征在于挑取单菌落接种于含有相应抗生素的丰富培养基试管内，于37℃、220rpm，培养14‐17h至生长对数期，将培养的菌液扩大至300ml含有相应抗生素的丰富培养基，37℃、220rpm，培养2.5‐3h至OD600为1.5‐1.7，加入终浓度为150～200μg/ml的氯霉素，于37℃、220rpm诱导培养约14‐20h，然后常规抽提方法进行抽提。所述的常规抽提方法优选碱裂解法。本发明通过氯霉素诱导，大大提高了低拷贝质粒的抽提量，成功降低基因组污染发生概率，提升产品一次通过率。