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公开(公告)号：CN110029118B
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN201910316885.9
申请日：2019-04-19
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种合成槲皮素‑4’‑葡萄糖苷的方法,将糖基转移酶UGT88A1或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因构建含双酶体系的重组菌;将重组菌使用IPTG作为诱导剂，在16~37℃诱导12~24 h，离心收集菌泥，利用超声破碎法破碎菌体，离心收集上清，得到粗酶液；将槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，在20‑40℃条件下反应8‑30h，使用甲醇终止反应，离心得到槲皮素‑4’‑葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示氨基酸序列发生突变，突变的氨基酸位点选自V18，I118，G181，S271中的一个或多个。该突变体制备简单，实现了槲皮素‑4’‑葡萄糖糖苷产量的提高。
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公开(公告)号：CN112695023A
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN202011386939.8
申请日：2020-12-02
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种来源于枸杞的糖苷酶及其应用，所述糖苷酶是经过分析对比整合得到的如SEQ No.1所示氨基酸序列的α‑葡萄糖苷酶，其核苷酸序列如SEQ No.2所示，该酶能够将L‑AA转化为单一的AA‑2G，无副产物生成。本发明所述的α‑糖苷酶可工业应用，反应条件简单且时间短，并且产物单一易于纯化。本发明的α‑糖苷酶和使用该酶生产AA‑2G的方法可以为酶法生成AA‑2G提供新思路。
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公开(公告)号：CN106754595B
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201611142783.2
申请日：2016-12-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D中的应用，所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因，将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet‑1的NdeI与XhoI位点之间，构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2，然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet‑SL2的NcoI和EcoRI位点之间，构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1，将重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1转化到宿主细胞中，得到重组菌。将重组菌诱导表达后取粗酶液，加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D，反应中使用重组菌破碎后的粗酶液，避免了酶的分离纯化，也无需制作冻干粉，反应液中不需添加UDP或UDP‑葡萄糖和任何细胞通透剂或其他化学试剂，环境友好性更佳。莱鲍迪甙D的产率高达10.8 g/L。
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公开(公告)号：CN110029118A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910316885.9
申请日：2019-04-19
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种合成槲皮素-4’-葡萄糖苷的方法,将糖基转移酶UGT88A1或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因连接得到重组质粒，构建含双酶体系的重组菌;将重组菌接种于100mL LB液体培养基中，25~40℃，取样，使OD600处于0.4～0.5时，使用IPTG作为诱导剂，在16~37℃，150~300r/min的条件下进行诱导12~24 h，离心收集菌泥，利用超声破碎法破碎菌体，8000r/min条件下离心收集上清，得到粗酶液；将槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，在20-40℃条件下反应8-30h，使用甲醇终止反应，离心得到槲皮素-4’-葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列，突变的氨基酸位点选自V18，I118，G181，S271中的一个或多个。该突变体制备简单，实现了槲皮素-4’-葡萄糖糖苷产量的提高。
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公开(公告)号：CN109234337A
公开(公告)日：2019-01-18
申请号：CN201811073927.2
申请日：2018-09-14
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种一种槲皮素糖苷的生物合成方法,将糖基转移酶UGT73G1或者其突变体的基因与蔗糖合酶基因连接得到重组质粒，构建含双酶体系的重组菌；将重组菌接种于LB液体培养基中，25~40℃，培养至OD600达到2-3时，添加诱导剂乳糖诱导12~20h，发酵液离心收集菌体，菌体破碎，离心收集上清液得到粗酶液；将槲皮素或异槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，反应8-30h，加入甲醇终止反应，离心得上清槲皮素-3，4’-二葡萄糖糖苷。所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示氨基酸序列发生突变的氨基酸序列，突变的氨基酸位点选自S151，T168，K274，T293，G361,S365,V371及F381中的一个或多个。该突变体制备简单，产量大，实现了槲皮素-3，4’二葡萄糖糖苷产量的提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105274160A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510772612.7
申请日：2015-11-11
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P17/06
CPC classification number: Y02P20/582
Abstract: 本发明公开了一种酶法不对称还原制备(S)-N-boc-3-羟基哌啶的方法，以氨基酸序列如SEQIDNO：2所示的醇脱氢酶为催化剂，以N-boc-3-哌啶酮为底物，NADH为辅酶体系，不对称还原制备(S)-N-boc-3-羟基哌啶。本发明首次将氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的醇脱氢酶应用于不对称还原制备(S)-N-boc-3-羟基哌啶中，其对底物的转化率高达99.34%，产物的对映体过量值为100%。反应体系简单、底物浓度高、高底物浓度的催化反应无需分批投料，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN103966277A
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201410218551.5
申请日：2014-05-22
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: Y02P20/588
Abstract: 本发明公开了一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法，该方法包括如下步骤：(1)以甲壳素为载体，以戊二醛为交联试剂，固定游离磷脂酶D得到磷脂酶D的固定化酶；(2)以步骤(1)制备得到的磷脂酶D的固定化酶为催化剂，以醋酸丁酯为有机相溶剂，以pH5.5、50mM的醋酸钠缓冲液为水相溶剂，在温度20～60℃条件下，L-丝氨酸与大豆磷脂按摩尔比10～100:1反应制备磷脂酰丝氨酸，反应结束后过滤回收磷脂酶D重复使用。本发明方法在双相催化体系中转酯率达到78％，固定化酶可以重复利用。方法简单，易于操作，制备成本低廉。
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公开(公告)号：CN103642765A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310727759.5
申请日：2013-12-25
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12P7/62
Abstract: 本发明公开了一种醇脱氢酶突变体，为野生型醇脱氢酶的氨基酸发生如下任意一种情况的突变：野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸，且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；野生型醇脱氢酶的序列中第13位丝氨酸突变为丙氨酸，且第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸，且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸，且第36位精氨酸突变为异亮氨酸；所述的野生型醇脱氢酶的序列如SEQ ID NO：2、4、6或8中的任意一项所示。
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公开(公告)号：CN102146422B
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201110025759.1
申请日：2011-01-24
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12P7/46
Abstract: 本发明公开了一种丁二酸的发酵生产工艺，以谷氨酸棒杆菌为生产菌株，先进行好氧富集，再进行厌氧发酵生产丁二酸，在厌氧发酵过程中CO2的提供以添加NH4HCO3、或(NH4)2CO3、或NH4OH与CO2的形式，或上述三种形式中任意两种或三种的组合。利用本发明的方法，最终回收有机酸时，避免大量金属离子的污染处理问题，同时可以回收利用NH4Cl，或者由于废液成分简单，可以制成氮肥，用于农业生产，从而在产品处理上节约成本，同时降低环境污染。
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公开(公告)号：CN102115718A
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN201010591434.5
申请日：2010-12-16
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种表达β-半乳糖苷酶的重组菌株及其构建方法和应用。克隆得到Thermus thermophilus HB27半乳糖苷酶基因bgal，并将其插入到真核表达载体pPIC9K上，转化毕赤酵母菌株GS 115内，可得到β-半乳糖苷酶表达量达到14000U/ml。β-半乳糖苷酶基因bgal表达的分子量为58Dk，最适温度为70℃，其最适温度下很稳定。在pH6.5时该乳糖酶水解活力最高，而且稳定性较好。高效表达的β-半乳糖苷酶可直接用于乳制品的巴氏消毒法，可以做到灭菌的同时降解乳糖，避免了灭菌后添加酶所造成的二次污染。在60度，30分钟，HB27半乳糖苷酶可以降解牛奶90％的乳糖。
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