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公开(公告)号：CN104862291B
公开(公告)日：2018-02-06
申请号：CN201510230022.1
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了cupin蛋白结构域在制备α‑淀粉酶抑制剂中的应用。本发明中发现了植物贮藏蛋白cupin结构具有α‑淀粉酶抑制剂功能，它是通过鹰嘴豆种子中α‑淀粉酶抑制剂的纯化及鉴定、蛋白原核表达并测定其抑制活性、cupin结构域缺失及氨基酸突变、来源于其他作物具有cupin结构域蛋白的原核表达并测定α‑淀粉酶抑制剂活性、测定cupin结构域蛋白生物学特性等手段实现的，并发现cupin结构域影响蛋白的α‑淀粉酶抑制活性具有普遍性。本发明可操作性强、重复性好、效率高、适用性强，对进一步发掘植物中贮藏蛋白类型α‑淀粉酶抑制剂具有广泛而深远的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102924592A
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201210500059.8
申请日：2012-11-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于食品科学生物活性成分分离纯化领域，涉及一种鹰嘴豆种子中蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的提取分离方法。本发明以鹰嘴豆成熟种子为材料，经提取液浸提-适温加热-硫酸铵分级沉淀-离子交换色谱-高效液相反相色谱对鹰嘴豆种子中所含蛋白类型α-淀粉酶抑制剂进行分离纯化。目前，经多次实验证明，采用此提取方法可分离到两种蛋白类型α-淀粉酶抑制剂，其中一个属鹰嘴豆清蛋白，分子量约为25.0kDa，具植物凝集素作用，在NCBI中基因序列号为gi|339961380；另一个属鹰嘴豆球蛋白，分子量约为60.0kDa，在NCBI中基因序列号为gi|75266099。该分离方法得到目的蛋白多，纯度高，α-淀粉酶抑制活性强，提取程序简便，是一套适用于鹰嘴豆种子中蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的提取分离方法。
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公开(公告)号：CN104862330B
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201510230195.3
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有Cupin结构功能域的贮藏蛋白类型α‑淀粉酶抑制剂的生产和纯化方法；包括(1)原核表达体系构建及菌液培养诱导表达；(2)原核表达可溶性蛋白纯化；和/或(3)原核表达包涵体蛋白纯化及蛋白复性。目前，经过多次反复实验证明，采用本发明工艺流程，对此种α‐淀粉酶抑制剂进行工艺生产，得到的蛋白产量高、纯度高，生产工艺简单方便，生产周期短，无需价格昂贵设备，是一种适合于此α‐淀粉酶抑制剂生产纯化的优良生物工艺方法。
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公开(公告)号：CN104862330A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510230195.3
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有Cupin结构功能域的贮藏蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的生产和纯化方法；包括(1)原核表达体系构建及菌液培养诱导表达；(2)原核表达可溶性蛋白纯化；和/或(3)原核表达包涵体蛋白纯化及蛋白复性。目前，经过多次反复实验证明，采用本发明工艺流程，对此种α‐淀粉酶抑制剂进行工艺生产，得到的蛋白产量高、纯度高，生产工艺简单方便，生产周期短，无需价格昂贵设备，是一种适合于此α‐淀粉酶抑制剂生产纯化的优良生物工艺方法。
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公开(公告)号：CN104862291A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510230022.1
申请日：2015-05-07
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/2414 , A01N65/20 , C12Y302/01001
Abstract: 本发明公开了cupin蛋白结构域在制备α-淀粉酶抑制剂中的应用。本发明中发现了植物贮藏蛋白cupin结构具有α-淀粉酶抑制剂功能，它是通过鹰嘴豆种子中α-淀粉酶抑制剂的纯化及鉴定、蛋白原核表达并测定其抑制活性、cupin结构域缺失及氨基酸突变、来源于其他作物具有cupin结构域蛋白的原核表达并测定α-淀粉酶抑制剂活性、测定cupin结构域蛋白生物学特性等手段实现的，并发现cupin结构域影响蛋白的α-淀粉酶抑制活性具有普遍性。本发明可操作性强、重复性好、效率高、适用性强，对进一步发掘植物中贮藏蛋白类型α-淀粉酶抑制剂具有广泛而深远的意义。
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公开(公告)号：CN102924592B
公开(公告)日：2014-12-31
申请号：CN201210500059.8
申请日：2012-11-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/81
Abstract: 本发明属于食品科学生物活性成分分离纯化领域，涉及一种鹰嘴豆种子中蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的提取分离方法。本发明以鹰嘴豆成熟种子为材料，经提取液浸提-适温加热-硫酸铵分级沉淀-离子交换色谱-高效液相反相色谱对鹰嘴豆种子中所含蛋白类型α-淀粉酶抑制剂进行分离纯化。目前，经多次实验证明，采用此提取方法可分离到两种蛋白类型α-淀粉酶抑制剂，其中一个属鹰嘴豆清蛋白，分子量约为25.0kDa，具植物凝集素作用，在NCBI中基因序列号为gi339961380；另一个属鹰嘴豆球蛋白，分子量约为60.0kDa，在NCBI中基因序列号为gi75266099。该分离方法得到目的蛋白多，纯度高，α-淀粉酶抑制活性强，提取程序简便，是一套适用于鹰嘴豆种子中蛋白类型α-淀粉酶抑制剂的提取分离方法。
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