公开(公告)号：CN117384946A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211408927.X

申请日：2022-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  姚数琦 ,  谢洋 ,  沈峰 ,  王爽

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的萝卜遗传转化方法及其应用，选取4～5d苗龄的萝卜‘NAU‑LHZ’带柄子叶为外植体，预培养3d后，用1/2MS液体培养基重悬农杆菌作为侵染液，将外植体于28℃ 200rpm摇床中振荡培养20min，放滤纸上晾干，在黑暗下共培养3d后转到脱羧培养基上分化培养，直至生根培养获得萝卜再生植株。提取萝卜叶片DNA，使用通用引物鉴定是否导入目的基因。同时采用RT‑qPCR验证目的基因是否过表达。此外，将电泳鉴定的萝卜转基因阳性苗自交，获得T2代株系后提取DNA，采用通用引物扩增鉴定萝卜转基因阳性苗，T2代株系转化效率达46.15％。与前人已报道的浸花法相比，本发明提高了转化和筛选效率，为萝卜高效转化和基因功能验证提供了新方法，也为萝卜等再生顽拗型作物的转基因研究提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN116926106A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202211523455.2

申请日：2022-11-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  马银波 ,  王沦 ,  姚数琦

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  C12N15/53 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用，首次在萝卜‘NAU‑067’中通过根癌农杆菌介导的遗传转化实现萝卜RsPDS基因编辑。将培养4～5d无菌苗切取带柄子叶后置于MS固体培养基上预培养3d，根癌农杆菌侵染萝卜带柄子叶后在MS固体培养基上共培养3d，之后置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基上诱导不定芽。以RsPDS基因为例，出芽后采用GUS染色初步分析是否为转基因阳性愈伤组织，采用改良CTAB法提取白化苗DNA，PCR扩增发现1株新叶全白化苗在靶位点2存在3个碱基缺失和单个碱基替换，1株白化嵌合株在靶位点1存在3个碱基插入和单个碱基替换。本发明建立起一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜功能基因编辑技术体系，为创制突变体、高效验证基因的生物学功能以及创制萝卜优异种质提供了重要技术支撑。

公开(公告)号：CN118985213B

公开(公告)日：2025-02-07

申请号：CN202411477743.8

申请日：2024-10-22

Applicant: 南京农业大学三亚研究院

Inventor： 赵晋铭 ,  丁文涛 ,  邢邯 ,  郭娜 ,  林剑语 ,  程起灿 ,  姚数琦

IPC: A01C1/02

Abstract: 本发明涉及一种基于多指标综合评价的大豆种子活力评估方法，属于植物生产技术领域。采用人工加速老化法，针对从包含23,587份大豆资源的种质库中筛选出的126个大豆地方品种的11个与种子活力相关的指标进行了测定，通过主成分分析，建立了大豆种子活力综合评价体系，在此基础上构建了简洁高效种子活力评估模型：V=‑0.026+0.625×RSL+0.485×RGI。在该模型中，相对幼苗长度（RSL）和相对发芽指数（RGI）对种子活力有显著的积极影响。该模型提供了优良活力评估性能和87.30%的活力分类准确率。本发明为大豆种子活力的科学评价提供了一种新的方法，可以有效评估大豆种子播前的活力以及监测大豆种子活力的变化，从而提高大豆种植效率和产量，同时为种子质量控制与筛选提供了有价值的方法。

公开(公告)号：CN117143910A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311133160.9

申请日：2023-09-04

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王燕 ,  柳李旺 ,  胡秋艳 ,  姚数琦 ,  秦跳姣 ,  易小芳 ,  李冰霜

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明提供了一种萝卜原位转化方法，包括以下步骤：对萝卜种子催芽播种至两叶一心时期，获得转化受体；活化携带目的基因的根癌农杆菌菌液并制备侵染液；切除幼苗的顶端，仅保留一片子叶，形成伤口，并用菌液注射伤口部位；对伤口部位包裹处理并共培养2d；14d后伤口部位形成新芽点；21d后原位再生芽逐渐长大，形成一个完整植株，进而鉴定转基因植株。相比于传统的组培方法，本方法能有效的提高萝卜转化效率，且操作简单，转化周期短，为萝卜基因功能验证和种质创新提供技术支撑。

公开(公告)号：CN118985213A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411477743.8

申请日：2024-10-22

Applicant: 南京农业大学三亚研究院

Inventor： 赵晋铭 ,  丁文涛 ,  邢邯 ,  郭娜 ,  林剑语 ,  程起灿 ,  姚数琦

IPC: A01C1/02

Abstract: 本发明涉及一种基于多指标综合评价的大豆种子活力评估方法，属于植物生产技术领域。采用人工加速老化法，针对从包含23,587份大豆资源的种质库中筛选出的126个大豆地方品种的11个与种子活力相关的指标进行了测定，通过主成分分析，建立了大豆种子活力综合评价体系，在此基础上构建了简洁高效种子活力评估模型：V=‑0.026+0.625×RSL+0.485×RGI。在该模型中，相对幼苗长度（RSL）和相对发芽指数（RGI）对种子活力有显著的积极影响。该模型提供了优良活力评估性能和87.30%的活力分类准确率。本发明为大豆种子活力的科学评价提供了一种新的方法，可以有效评估大豆种子播前的活力以及监测大豆种子活力的变化，从而提高大豆种植效率和产量，同时为种子质量控制与筛选提供了有价值的方法。