公开(公告)号：CN117143910A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311133160.9

申请日：2023-09-04

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王燕 ,  柳李旺 ,  胡秋艳 ,  姚数琦 ,  秦跳姣 ,  易小芳 ,  李冰霜

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明提供了一种萝卜原位转化方法，包括以下步骤：对萝卜种子催芽播种至两叶一心时期，获得转化受体；活化携带目的基因的根癌农杆菌菌液并制备侵染液；切除幼苗的顶端，仅保留一片子叶，形成伤口，并用菌液注射伤口部位；对伤口部位包裹处理并共培养2d；14d后伤口部位形成新芽点；21d后原位再生芽逐渐长大，形成一个完整植株，进而鉴定转基因植株。相比于传统的组培方法，本方法能有效的提高萝卜转化效率，且操作简单，转化周期短，为萝卜基因功能验证和种质创新提供技术支撑。

公开(公告)号：CN114958904B

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202210536365.0

申请日：2022-05-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王燕 ,  王爽 ,  易小芳 ,  应佳丽 ,  董俊辉 ,  柳李旺 ,  徐良

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/06 ,  A01H6/20 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。

公开(公告)号：CN116790782A

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202211442705.X

申请日：2022-11-17

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王燕 ,  易小芳 ,  王爽 ,  秦跳姣 ,  柳李旺 ,  徐良 ,  梅燚

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/82 ,  A01H5/06 ,  A01H6/06 ,  A01G7/06

Abstract: 本发明涉及一种基于非组培、快速验证萝卜盐胁迫响应基因功能的方法，包括：对萝卜种子进行催芽播种；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；在非组培条件下切除实生根，获得无根苗并浸入侵染液进行侵染；侵染后的无根苗移栽至营养土并诱导毛状根；通过表型筛选和PCR检测鉴定阳性复合植株；对复合植株进行盐处理，通过表型和超氧阴离子自由基含量(O2‑)测定来评价阳性复合植株的耐盐性。本发明不仅提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短发根时间，而且避免了无菌操作。成功验证了萝卜盐胁迫响应基因的功能，为萝卜本体基因功能验证提供技术参考。

公开(公告)号：CN114958904A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210536365.0

申请日：2022-05-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王燕 ,  王爽 ,  易小芳 ,  应佳丽 ,  董俊辉 ,  柳李旺 ,  徐良

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/06 ,  A01H6/20 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。