公开(公告)号：CN117384946A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211408927.X

申请日：2022-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  姚数琦 ,  谢洋 ,  沈峰 ,  王爽

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的萝卜遗传转化方法及其应用，选取4～5d苗龄的萝卜‘NAU‑LHZ’带柄子叶为外植体，预培养3d后，用1/2MS液体培养基重悬农杆菌作为侵染液，将外植体于28℃ 200rpm摇床中振荡培养20min，放滤纸上晾干，在黑暗下共培养3d后转到脱羧培养基上分化培养，直至生根培养获得萝卜再生植株。提取萝卜叶片DNA，使用通用引物鉴定是否导入目的基因。同时采用RT‑qPCR验证目的基因是否过表达。此外，将电泳鉴定的萝卜转基因阳性苗自交，获得T2代株系后提取DNA，采用通用引物扩增鉴定萝卜转基因阳性苗，T2代株系转化效率达46.15％。与前人已报道的浸花法相比，本发明提高了转化和筛选效率，为萝卜高效转化和基因功能验证提供了新方法，也为萝卜等再生顽拗型作物的转基因研究提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN116926105A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202211408928.4

申请日：2022-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  王爽 ,  谢洋 ,  沈峰

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/65 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用，首次在‘NAU‑LHZ’萝卜中通过发根农杆菌介导的遗传转化实现萝卜功能基因编辑。发根农杆菌侵染无根幼苗后，在MS固体培养基上共培养3d后，置于MS+300mg/L Carb的固体培养基上培养不定根。以RsGLK2.1基因为例，1株发根农杆菌诱导的不定根在靶位点2中成功被编辑，将成功编辑的不定根置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基中诱导愈伤组织，通过愈伤组织表型分析进一步证实其成功编辑。本发明可快速验证萝卜关键候选基因的生物学功能，极大地加快萝卜优异种质创新与新品种选育进程。