公开(公告)号：CN117866924A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202311581379.5

申请日：2023-11-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 赵书红 ,  阮进学 ,  熊友才 ,  李新云 ,  苏寅钰 ,  何瑞高 ,  席晓宁 ,  韩晓松 ,  谢胜松

IPC: C12N9/22 ,  C12N9/12 ,  C12N15/55 ,  C12N15/54 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了多sgRNA介导的EXPERTplus先导基因编辑系统及其应用。本发明为了提升EXPERT系统的编辑效率，在EXPERT系统的基础上，在ori‑sgRNA与expegRNA间增设了多条sgRNA。结果显示，EXPERTplus系统可以进一步提高编辑效率。相比于PE系统，EXPERTplus系统可编辑的范围更广，可以实现88bp的精确替换，且编辑效率更高。此外，由于开发的EXPERTplus系统仅仅只在一条链上产生切口，没有产生DNA双链断裂，相比于PE3与twin PE系统均可能会产生DNA双链断裂，其将产生更低的indels，因此更为安全。

公开(公告)号：CN116004716A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211107250.6

申请日：2022-09-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 阮进学 ,  赵书红 ,  苏寅钰 ,  李新云 ,  熊友才 ,  韩晓松 ,  何瑞高 ,  王晓萱 ,  席晓宁 ,  杨致远 ,  余梅 ,  谢胜松 ,  刘向东

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用epi‑dCas9‑FokI系统进行高效基因编辑的方法，具体地公开了一种将附着体元件（EBNA1/oriP）介导融合蛋白dCas9‑FokI表达进行基因编辑的方法，所述epi‑dCas9‑FokI系统由于使用二聚形式产生切割的FokI核酸酶，因此不会破坏sgRNA的识别序列，再利用EBNA1/oriP附着体介导持续表达dCas9‑FokI核酸酶，持续切割未发生敲除的序列，达到提高敲除效率和增加对未发生目的编辑的靶位点进行重复多次编辑的目的。利用该方法可以高效敲除特定核苷酸序列，为基因功能研究提供可行的方法和强大的基因编辑工具。