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公开(公告)号：CN113325019A
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202110608802.0
申请日：2021-06-01
Applicant: 北京大学
IPC: G01N23/2202 , G01N1/34 , G01N1/38
Abstract: 本发明公开了一种蓝藻藻胆体冷冻电镜制样的方法，通过对体外纯化的蓝藻藻胆体蛋白进行交联，以及“正面上样，反面稀释”的上样方式克服了藻胆体常规冷冻制样的解聚、衬度差和优势取向的三大难点，应用本发明方法可以解析出了蓝藻藻胆体近原子级的高分辨率结构信息，为今后利用冷冻电镜解析各类蓝藻藻胆体的高分率结构提供了一种有效的方法。
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公开(公告)号：CN113025545A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110264337.3
申请日：2021-03-11
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种高效固氮的蓝藻工程菌及其制备方法和应用，通过敲除野生型鱼腥藻PCC 7120的细胞分裂相关因子FTN的基因，得到异形胞体积约是正常异形胞体积2倍大小的鱼腥藻工程菌△FTN。该鱼腥藻工程菌△FTN的固氮酶活性是野生型的2.3倍，且生长速度较快，代时约为20小时，具有在农业上推广应用的前景，为固氮蓝藻在农业生产上的应用提供了一个新的选择。
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公开(公告)号：CN107287331B
公开(公告)日：2020-06-26
申请号：CN201710646653.0
申请日：2017-08-01
Applicant: 北京大学
IPC: C12Q1/6897 , C12N15/74
Abstract: 本发明公布了一种高效检测蓝藻细胞周期的方法，利用酰胺酶AmiC3或其同源蛋白和荧光蛋白的融合蛋白来标记蓝藻细胞分裂环，通过观测荧光显示的蓝藻细胞分裂环出现的状态来判断其细胞周期。本发明解决了目前蓝藻不能很好的进行细胞周期检测的技术问题，为研究蓝藻细胞分裂与分化的联系提供了一条途径，也为通过检测细胞周期来评定蓝藻的生长状态提供了一条便捷直观的方法。
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公开(公告)号：CN110846340A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911148764.4
申请日：2019-11-21
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种一步转化进行蓝藻基因无痕敲除的方法，通过一步遗传转化将两个同向loxP序列以及序列之间包括的诱导型启动子驱动的Cre基因和选择标记基因序列替换目的基因，然后利用诱导型启动子诱导Cre重组酶的表达，最终获得无痕敲除的突变体。该方法只需要进行一步遗传转化，通过控制培养基中诱导条件来达到蓝藻基因的无痕敲除，大幅度缩短了在蓝藻中进行无痕敲除的时间，且能降低培养成本，减少抗生素使用和基因对环境的污染，也为今后更快速地开发各种优质无抗性的蓝藻工程菌底盘生物提供了一种方法。
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公开(公告)号：CN106191090B
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201610564902.7
申请日：2016-07-18
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种无抗生素表达外源基因的蓝藻工程菌系统及其制备和应用。所述蓝藻工程菌表达系统包括：聚球藻PCC7002的△psbC突变体和整合载体，整合载体具有核心元件FlanKA—P1—MCS—P2—psbC—FlanKB，其中同源片段FlanKA和FlanKB能将P1—MCS—P2—psbC片段整合到聚球藻PCC7002内源质粒pAQ3的C0006和C0007的基因间区；外源基因插入到多克隆位点MCS中，由启动子P1调控表达；P2—psbC用来回复psbC基因缺失。本发明让蓝藻不用依赖抗生素培养压力来高效表达外源基因，不仅可大大降低利用蓝藻做生物反应器的成本，更可以减少因抗生素造成的环境污染和不安全性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102242065B
公开(公告)日：2012-10-10
申请号：CN201110170507.8
申请日：2011-06-22
Applicant: 北京大学
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明公布了一种蓝藻工程菌及其制备方法和应用。所述蓝藻工程菌为cesA基因缺失的蓝藻(Synechococcus sp.)PCC 7002突变体；该突变体的质粒或基因组上整合有木醋杆菌(Gluconacetobacter xylinum)ATCC 53582的7个纤维素合成相关基因cmcase、ccp、acsA、acsB、acsC、acsD、bglxA；所述7个基因由蓝藻(Synechococcus sp.)PCC 7002或蓝藻(Synechocystis sp.)PCC 6803的cpcBA基因的启动子PcpcBA来启动表达。该工程菌纤维素含量占细胞壁干重的13％左右，同时，该蓝藻工程菌生产纤维素的生长周期短，而且不存在木材中的木质素的污染问题，其提取和纯化过程可以大大简化，并且对环境的污染程度也可以相应的大大减少，是一种理想的生产纤维素的生物工程菌，进而作为生产生物乙醇的原料。
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公开(公告)号：CN114878289A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210812369.7
申请日：2022-07-12
Applicant: 北京大学
IPC: G01N1/34 , G01N23/20008 , G01N23/04
Abstract: 本发明公开了一种耐低温低盐的蓝藻藻胆体样品的制备方法。与常规的蓝藻藻胆体体外纯化方法相比，本发明包含了一特殊处理步骤：在蔗糖梯度纯化的磷酸盐缓冲液中加入终浓度为0.0075~0.015%（w/v）的1,5‑戊二醛（GA）和10~500 nM的BS3两种交联剂。所得到的藻胆体样品在4℃和10 mM磷酸盐的低温低盐条件下，可以在48 h内维持其稳定结构，而不会解聚。该耐低温低盐的藻胆体为冷冻电镜解析藻胆体结构，体外研究藻胆体与光系统复合体的相互作用以及能量传递的机制等提供了可能性。
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公开(公告)号：CN113325019B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202110608802.0
申请日：2021-06-01
Applicant: 北京大学
IPC: G01N23/2202 , G01N1/34 , G01N1/38
Abstract: 本发明公开了一种蓝藻藻胆体冷冻电镜制样的方法，通过对体外纯化的蓝藻藻胆体蛋白进行交联，以及“正面上样，反面稀释”的上样方式克服了藻胆体常规冷冻制样的解聚、衬度差和优势取向的三大难点，应用本发明方法可以解析出了蓝藻藻胆体近原子级的高分辨率结构信息，为今后利用冷冻电镜解析各类蓝藻藻胆体的高分率结构提供了一种有效的方法。
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公开(公告)号：CN110846340B
公开(公告)日：2021-03-23
申请号：CN201911148764.4
申请日：2019-11-21
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种一步转化进行蓝藻基因无痕敲除的方法，通过一步遗传转化将两个同向loxP序列以及序列之间包括的诱导型启动子驱动的Cre基因和选择标记基因序列替换目的基因，然后利用诱导型启动子诱导Cre重组酶的表达，最终获得无痕敲除的突变体。该方法只需要进行一步遗传转化，通过控制培养基中诱导条件来达到蓝藻基因的无痕敲除，大幅度缩短了在蓝藻中进行无痕敲除的时间，且能降低培养成本，减少抗生素使用和基因对环境的污染，也为今后更快速地开发各种优质无抗性的蓝藻工程菌底盘生物提供了一种方法。
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公开(公告)号：CN102250774A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110207497.0
申请日：2011-07-22
Applicant: 北京大学
IPC: C12N1/13 , C12N15/09 , C12N15/31 , C12N15/63 , C12P19/04 , C12P7/10 , C08L1/02 , A61L27/20 , A61L27/60 , A23L1/30 , C12R1/89
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明公布了一种分泌结晶型纤维素的蓝藻工程菌及其制备方法和应用。所述蓝藻工程菌为cesA基因缺失的蓝藻(Synechococcus sp.)PCC 7002突变体；该突变体的基因组上整合有包含木醋杆菌(Gluconacetobacter xylinum)ATCC 53582的7个纤维素合成相关基因cmcase、ccp、acsA、acsB、acsC、acsD、bg1xA在内的长度100392bp的基因组片段。所述蓝藻工程菌的纤维素含量达到自身细胞壁干重的约7％，是一种理想的生产结晶型纤维素的生物工程菌。该结晶型纤维素除了用于生产乙醇而用作生物能源之外，经过X射线衍射检测，发现此种纤维素结晶型良好，为I型，因此还可以用于生产人造皮肤，用于生产高质量的膜材料，以及用于制造食品添加剂等。
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