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公开(公告)号：CN117821560A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410037274.1
申请日：2024-01-10
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种测定Phi29DNA聚合酶绝对活性的方法，该方法为：采用环状双链DNA为模板，在含有扩增引物和dNTPs的反应体系中，以待测Phi29DNA聚合酶引发延伸复制反应，消耗反应体系中的dNTPs；然后根据预先构建的表征dATP的浓度与萤光值之间关系的标准曲线f1计算dNTPs中的dATP的剩余量，再根据Phi29DNA聚合酶的绝对活性定义，利用公式计算得到Phi29DNA聚合酶的绝对活性。本发明的方法无放射性污染，具有同时测定Phi29DNA聚合酶聚合活性与链置换活性、绝对定活、操作简便、快速灵敏、成本低廉等优点，可用于高通量、自动化的聚合酶活性筛选。
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公开(公告)号：CN119639711A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202311196220.1
申请日：2023-09-15
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体提供了热稳定性提高的逆转录酶UCRT vL突变体，该逆转录酶UCRT vL突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体，与野生型逆转录酶UCRT vL相比，突变体在65℃下半衰期更长；三突变体效果更好，其半衰期大约是野生型逆转录酶UCRT的3倍。本发明还提供了包含该突变体的基因工程菌。通过本发明所提供的构建方法得到的逆转录酶UCRT vL突变体热稳定性更好，在较高温度下用于RNA逆转录为cDNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN119639710A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202311195991.9
申请日：2023-09-15
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体提供了热稳定性提高的UCRT VI耐热型逆转录酶突变体，这种突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体，与野生型UCRT VI耐热型逆转录酶相比，突变体在65℃下半衰期更长；双突变体效果更好，其半衰期大约是野生型DNA聚合酶的3倍。本发明还提供了包含该突变体的基因工程菌。通过本发明所提供的构建方法得到的UCRT耐热型逆转录酶突变体热稳定性更好，在较高温度下逆转录合成DNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118064400A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410469408.7
申请日：2024-04-18
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 , 济南国科医工科技发展有限公司
Abstract: 本发明公开了一种高催化活性的S选择性ω‑转氨酶突变体及其构建方法和应用，该S选择性ω‑转氨酶突变体是通过将如SEQ ID NO.1所示的野生型ω‑转氨酶TbTA氨基酸序列的第263位异亮氨酸突变为丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸或组氨酸得到的。本发明获得的突变体TbTA‑I263A、TbTA‑I263G催化苯乙酮的酶活相较于野生型提升67.83倍和61.26倍，热稳定性与野生型接近或更好；突变体TbTA‑I263C、TbTA‑I263M、TbTA‑I263V、TbTA‑I263F和TbTA‑I263H酶活分别提升11.85倍、8.76倍、3.56倍、3.49倍和2.55倍。
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公开(公告)号：CN119639714A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202311196679.1
申请日：2023-09-15
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体提供了热稳定性提高的UCRT X耐热型逆转录酶突变体，本发明提供的UCRT耐热型逆转录酶突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体，与野生型UCRT X耐热型逆转录酶相比，突变体在65℃下半衰期更长；双突变体效果更好，其半衰期大约是野生型DNA聚合酶的4倍。本发明还提供了包含该突变体的基因工程菌。通过本发明所提供的构建方法得到的UCRT耐热型逆转录酶突变体热稳定性更好，在较高温度下逆转录合成DNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119639713A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202311196639.7
申请日：2023-09-15
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体提供了热稳定性提高的逆转录酶UCRT vZ突变体，逆转录酶UCRT vZ突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体，与野生型逆转录酶UCRT vZ相比，突变体在65℃下半衰期更长；双突变体效果更好，其半衰期大约是野生型逆转录酶UCRT vZ的4倍。本发明还提供了包含该突变体的基因工程菌。通过本发明所提供的构建方法得到的逆转录酶UCRT vZ突变体热稳定性更好，在较高温度下用于RNA逆转录为cDNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN119639712A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202311196238.1
申请日：2023-09-15
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体提供了热稳定性提高的UCRT耐热型逆转录酶突变体，突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体，与野生型UCRT III耐热型逆转录酶相比，突变体在65℃下半衰期更长；双突变体效果更好，其半衰期大约是野生型DNA聚合酶的4倍。本发明还提供了包含该突变体的基因工程菌。通过本发明所提供的构建方法得到的UCRT耐热型逆转录酶突变体热稳定性更好，在较高温度下逆转录合成DNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118460498B
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202410933065.5
申请日：2024-07-12
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 , 济南国科医工科技发展有限公司
Abstract: 本发明公开了一种高活性耐热转氨酶突变体及其编码基因、构建方法和应用，该高活性耐热转氨酶突变体是通过将如SEQ ID NO.1所示的野生型转氨酶MhTA氨基酸序列的第61位色氨酸突变为丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸或缬氨酸得到的。本发明获得的5种突变体（W61A、W61C、W61G和W61V）催化前手性酮的活性显著高于突变前的野生型（简称WT），具体表现为：W61A、W61C、W61G和W61V突变体催化5‑甲氧基‑2‑萘满酮的活性分别是野生型的43.03、192.1、25.87和77.48倍。从催化活性提升效果可以看出，本发明公开的转氨酶突变体具有催化合成罗替戈汀手性中间体的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118064400B
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410469408.7
申请日：2024-04-18
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 , 济南国科医工科技发展有限公司
Abstract: 本发明公开了一种高催化活性的S选择性ω‑转氨酶突变体及其构建方法和应用，该S选择性ω‑转氨酶突变体是通过将如SEQ ID NO.1所示的野生型ω‑转氨酶TbTA氨基酸序列的第263位异亮氨酸突变为丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸或组氨酸得到的。本发明获得的突变体TbTA‑I263A、TbTA‑I263G催化苯乙酮的酶活相较于野生型提升67.83倍和61.26倍，热稳定性与野生型接近或更好；突变体TbTA‑I263C、TbTA‑I263M、TbTA‑I263V、TbTA‑I263F和TbTA‑I263H酶活分别提升11.85倍、8.76倍、3.56倍、3.49倍和2.55倍。
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公开(公告)号：CN117106855B
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202311382378.8
申请日：2023-10-24
Applicant: 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
IPC: C12Q1/48
Abstract: 本发明公开了一种测定Taq DNA聚合酶绝对活性的方法，该方法为：以环状单链DNA为模板，在含有扩增引物和dATP的反应体系中，以待测Taq DNA聚合酶引发延伸复制反应，消耗反应体系中的dNTPs；然后测定dATP的消耗量，再根据预先构建的表征Taq DNA聚合酶的绝对活性与dATP消耗量之间关系的标准曲线f1计算得到Taq DNA聚合酶的绝对活性。本发明的方法无放射性污染，具有绝对定活、操作简便、快速灵敏、成本低廉等优点，可用于高通量、自动化的聚合酶活性筛选。
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