一种猪脑心肌炎病毒HB10株感染性克隆质粒

    公开(公告)号:CN104232668A

    公开(公告)日:2014-12-24

    申请号:CN201410330789.7

    申请日:2014-07-11

    Abstract: 本发明提供了一种猪脑心肌炎病毒HB10株感染性克隆质粒及其构建方法与应用,提供人工合成5′UTR和3′UTR序列并在中间加入多克隆位点(MCS)的方法,得到中间质粒pOK12-EMCV-5′UTR-MCS-3′UTR。本发明在合成EMCV5′UTR时,将polyC的碱基设定为15个。本发明利用设计的特异引物和特定的PCR反应条件,快速扩增EMCV基因组F1片段(6699bp),并成功地连接到pOK12-5′UTR-MCS-3′UTR质粒,得到pOK12-rEMCV-H10B质粒,该cDNA感染性克隆质粒命名为pOK12-rEMCV-H10B。利用该质粒成功拯救出病毒-rEMCV-HB10,该拯救毒与母本病毒相比毒力减弱。利用EMCV-HB10的cDNA感染性克隆可以研究EMCV病毒致弱机理及开发EMCV低毒力的减毒疫苗。利用该病毒的cDNA感染性克隆为载体插入不同病毒保护性抗原基因,构建不同嵌合病毒,以及由此开发出双价或多价疫苗及其他可能的应用。

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