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公开(公告)号：CN115595327B
公开(公告)日：2025-04-15
申请号：CN202110721143.1
申请日：2021-06-28
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种抗ALV‑J的鸡chNHE1基因编辑细胞系及其构建方法。本发明利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选，将ALV‑J细胞受体chNHE1基因的关键氨基酸位点V33进行突变以及W38进行缺失，同时为了便于后期基因编辑结果的鉴定，对其编码的第34‑37位氨基酸密码子进行同义替换。结果表明，含有W38位点缺失及V33位点突变的替换序列可高效定点替换chNHE1基因的相应序列，chNHE1基因编辑细胞系可在不影响细胞增殖水平的条件下抵抗ALV‑J的感染。本发明通过对chNHE1作为ALV‑J受体的关键氨基酸位点的突变，建立了高效的鸡chNHE1基因编辑细胞系的构建方法，为进一步研究chNHE1基因的功能奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114592088B
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202210151323.5
申请日：2022-02-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有多重PCR引物组。所述的多重PCR引物组由1条通用上游引物，和分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ以及ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物组成，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ、ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2‑5所示。实验结果表明，该方法敏感性高，特异性良好，对人工感染动物试验样品检测结果表明，mPCR与常规PCR方法检测结果一致，符合率为100％，适用于禽病毒性关节炎临床诊断、流行病学调查以及临床监测工作。
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公开(公告)号：CN112500458B
公开(公告)日：2022-12-16
申请号：CN202011473614.3
申请日：2020-12-15
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒新型变异株亚单位疫苗、其制备方法及应用。针对IBDV新型变异株的流行，本发明对IBDV新型变异株代表毒株SHG19主要保护性蛋白VP2的基因表达盒进行了设计，引入了利于其正确构象形成的元件，构建了重组原核表达质粒，制备了重组大肠杆菌基因工程菌，经过表达条件和纯化条件的摸索，高效制备了IBDV新型变异株病毒样颗粒，将该病毒样颗粒与佐剂乳化制备成疫苗，试验结果显示，该疫苗不仅对同源的新型变异株产生了100％的免疫保护，而且对异源的vvIBDV的致死性攻击也产生了良好的免疫保护。本发明的提出为IBDV新型变异株以及超强毒株的防治提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN114592088A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210151323.5
申请日：2022-02-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有多重PCR引物组。所述的多重PCR引物组由1条通用上游引物，和分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ以及ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物组成，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ、ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2‑5所示。实验结果表明，该方法敏感性高，特异性良好，对人工感染动物试验样品检测结果表明，mPCR与常规PCR方法检测结果一致，符合率为100％，适用于禽病毒性关节炎临床诊断、流行病学调查以及临床监测工作。
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公开(公告)号：CN114231503A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111349642.9
申请日：2021-11-15
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/85 , C12N15/40 , A61K39/12 , A61K39/235 , A61P31/14 , A61P31/20 , A61P9/00 , A61P7/10 , A61P1/16 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒、血清4型禽腺病毒二联灭活疫苗及其制备方法和应用。本发明在血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rHN20的基础上，在FAdV‑4基因组开放阅读框42和43之间的长度为1966‑bp天然核苷酸缺失位点插入传染性法氏囊病病毒超强毒的VP2基因，获得了一种表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV‑4)疫苗株，命名为rHN20‑vvIBDV‑VP2。将该疫苗株制备成二联灭活疫苗，免疫保护实验证明，接种rHN20‑vvIBDV‑VP2二联灭活疫苗的SPF鸡可以完全抵抗FAdV‑4强毒株以及IBDV超强毒的攻毒感染，证明rHN20‑vvIBDV‑VP2二联灭活疫苗具有非常好的免疫原性。本发明的提出为防治鸡心包积液‑肝炎综合征以及鸡传染性法氏囊病提供了有效的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114107226A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111249164.4
申请日：2021-10-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/40 , C12N15/861 , C12N15/66 , A61K39/295 , A61K39/235 , A61K39/12 , A61P31/14 , A61P31/20 , A61P9/00 , A61P1/16 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种表达vvIBDV‑VP2蛋白的重组4型禽腺病毒活载体疫苗株及其构建方法和应用。本发明在血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rHN20的基础上，在FAdV‑4基因组开放阅读框42和43之间的长度为1966‑bp天然核苷酸缺失位点插入传染性法氏囊病病毒超强毒的VP2基因，获得了一种表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV‑4)活载体疫苗株，命名为rHN20‑vvIBDV‑VP2。免疫保护实验证明，免疫rHN20‑vvIBDV‑VP2的SPF鸡可以完全抵抗FAdV‑4强毒株以及IBDV超强毒株的攻毒感染，说明rHN20‑vvIBDV‑VP2具有非常好的免疫原性，可以作为防治鸡心包积液‑肝炎综合征以及鸡传染性法氏囊病的活载体疫苗毒株。
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公开(公告)号：CN111235117A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010090643.5
申请日：2020-02-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一株自然适应体外细胞培养的鸡传染性法氏囊病病毒经典株及其应用。所述的鸡传染性法氏囊病病毒经典株命名为IBD17JL01，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.19291。该病毒株为本发明首次分离鉴定的一株自然适应DF1和CEF体外细胞培养的鸡传染性法氏囊病病毒经典毒株，该株病毒能够直接在体外传代细胞系DF1细胞、CEF细胞或DT40细胞上增殖。将该毒株灭活后制备成灭活疫苗，可使免疫雏鸡对强毒攻击产生100％的保护效果。因此，该病毒株(IBD17JL01株)可以作为天然适应体外细胞培养的疫苗候选株，用于IBDV的免疫防控。
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公开(公告)号：CN105695422B
公开(公告)日：2019-12-10
申请号：CN201610147336.X
申请日：2016-03-15
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/295 , A61K39/21 , A61K39/245 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种表达J亚群禽白血病病毒(ALV‑J)Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，属于医学或兽医学技术领域。本发明利用重组克隆技术，将包含ALV‑J Gag和Env基因以及CAG启动子序列的基因片段CAG‑ALVGE插入到鸡马立克氏病病毒弱毒疫苗814株的US2基因内部，构建获得在US2基因内部插入CAG‑ALVGE表达框的重组粘粒，由其拯救获得表达ALV‑J Gag和Env基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株。研究表明，本发明获得的疫苗株具有与亲本毒814疫苗株同等的体外复制能力以及良好的遗传稳定性，并且能够同时抵抗MDV超强毒株以及ALV‑J超强毒株的攻击。由此可见，本发明获得的表达ALV‑J Gag和Env基因的重组MDV疫苗株可以用于制备预防或治疗禽白血病和鸡马立克氏病的药物。
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公开(公告)号：CN106244626B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201610574433.7
申请日：2016-07-20
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N15/66 , C12N7/01 , G01N33/68 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种能够表达ALV‑J囊膜蛋白的重组A亚群禽白血病病毒及其构建方法和用途，本发明以ALV‑A感染性克隆为骨架，将其囊膜蛋白替换为ALV‑J的囊膜蛋白，并在囊膜蛋白3’端携带luciferase报告基因，从而构建得到了能够表达ALV‑J囊膜蛋白的重组ALV‑A病毒的感染性克隆，实验证明，由该感染性克隆拯救得到的重组病毒具有较高的复制能力，病毒滴度达105.21TCID50/ml，是ALV‑J原型毒株的125倍，而且携带有luciferase报告基因，易于定量。该重组病毒能侵染表达chNHE1的293T细胞，最早在感染后8h即可检测到病毒，具有较高的敏感性。因此本发明的提出解决了传统ALV‑J病毒毒价低，病毒复制能力不高，以及在病毒感染的早期病毒量较少，不利于检测等问题，对于病毒与其受体的相关研究以及抗ALV‑J抗体检测有重要意义。
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公开(公告)号：CN105755015A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610161569.5
申请日：2016-03-21
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种表达鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的重组酵母菌株及其所表达的蛋白和用途。本发明所述的重组酵母菌株，含有经优化后的鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因序列，其能够高效表达VP2蛋白，且表达的重组VP2蛋白可以自我组装成病毒样颗粒。将本发明重组酵母菌株所表达的鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒蛋白制成疫苗免疫鸡，实验结果表明：本发明蛋白亚单位疫苗能有效诱导机体产生特异性的体液免疫应答，使免疫鸡获得100％的抵抗高致病力vvIBDV致死性攻击的保护，并可清除体内残留的病毒，达到清除性免疫的目的。因此，本发明的提出为鸡传染性法氏囊病的防治提供了一种新的技术手段。
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