公开(公告)号：CN115232099A

公开(公告)日：2022-10-25

申请号：CN202210959120.9

申请日：2022-08-10

申请人： 中国农业大学

发明人： 周立刚 ,  王保民 ,  王明安 ,  赖道万 ,  王伟轩 ,  傅小香 ,  徐丹 ,  李益豪

IPC分类号： C07D311/92 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K1/107 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

摘要： 本发明公开了一种稻绿核菌素半抗原、抗原、抗体及其制备方法与应用。所述半抗原为式II所示的化合物，该半抗原与载体蛋白BSA偶联后得到的稻绿核菌素抗原可作为免疫抗原免疫动物，进而制备得到针对主要稻绿核菌素的单克隆抗体。本发明还公开了小鼠杂交瘤细胞系4A12C6，其在CGMCC的登记入册编号为CGMCC No.45196，本发明使用的单克隆抗体由该杂交瘤细胞4A12C6CGMCC No.45196分泌产生。通过实验证明：本发明方法制备的单克隆抗体对主要稻绿核菌素的特异性好、灵敏度高。本发明可用于稻曲球、可能污染的水稻及其制品的大规模检测与质量控制，在主要稻绿核菌素的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。

公开(公告)号：CN107686518B

公开(公告)日：2019-12-06

申请号：CN201610639357.3

申请日：2016-08-05

申请人： 中国农业大学

发明人： 李秋艳 ,  付怡静 ,  黄广平 ,  王保民 ,  郝海阳 ,  尹志安 ,  李志远 ,  罗洁

IPC分类号： C07K16/12 ,  C12N15/13 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04

摘要： 本发明涉及基因工程，具体公开了一种抗大肠杆菌k88ac的单链抗体及其编码基因。本发明将抗k88ac抗原的抗体可变区基因，与猪的抗体恒定区通过linker序列连接，形成scFv‑Fc结构。构建CMV启动子调控scFv‑Fc基因表达的重组载体k88‑p CMV5，使其在细胞水平高效表达。通过western和ELISA检测抗体可正常表达；且具有与k88ac抗原的结合能力。本发明成功获得了针对k88ac大肠杆菌的抗体基因，为得到抗腹泻转基因猪群提供了新方法，对于农业发展具有很大的经济效益。

公开(公告)号：CN107356759B

公开(公告)日：2019-05-21

申请号：CN201710645436.X

申请日：2017-08-01

申请人： 中国农业大学

发明人： 周立刚 ,  王保民 ,  傅小香 ,  赖道万 ,  王晓晗

IPC分类号： C12N5/20 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种同时检测稻曲菌素A和稻曲菌素B的方法及其专用酶联免疫试剂盒。方法及试剂盒所使用的单克隆抗体是由小鼠杂交瘤细胞系4C4F11分泌产生的，小鼠杂交瘤细胞系4C4F11在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.14309。本发明所提供的单克隆抗体能同时识别稻曲菌素A和稻曲菌素B，利用该单克隆抗体制备得到的酶联免疫试剂盒可用于定性或定量同时检测出样品中稻曲菌素A和稻曲菌素B，线性检测范围在2～76ng/mL，具有快速、灵敏的优点。本发明在农业、畜牧业和食品工业均有广阔的应用前景，预期能创造较大的经济效益。

公开(公告)号：CN104569416B

公开(公告)日：2016-04-13

申请号：CN201510032949.4

申请日：2015-01-22

申请人： 中国农业大学

发明人： 周立刚 ,  王保民 ,  傅小香 ,  王晓晗 ,  赖道万 ,  孙伟波 ,  王阿利

IPC分类号： G01N33/577 ,  G01N30/89

摘要： 本发明公开了一种检测稻曲菌素B的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该方法及试剂盒所使用的抗稻曲菌素B的单克隆抗体是由杂交瘤细胞系1B5A10分泌产生的，该杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.10113。本发明所提供单克隆抗体是以稻曲菌素B-BSA溶液为包被抗原，通过间接竞争ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选得到的，特异性强，与稻曲菌素A的交叉反应率为13.91％；利用该单克隆抗体制备得到的间接竞争酶联免疫试剂盒，用于定性或定量检测样品中稻曲菌素B，线性检测范围在2.49ng/mL–107.35ng/mL，具有快速、灵敏的优点。

公开(公告)号：CN103159778B

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201310102015.4

申请日：2013-03-27

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  郭素琴 ,  崔永亮 ,  王敏 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张亮 ,  张瑞 ,  张威

IPC分类号： C07D493/20 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  G01N30/60

摘要： 本发明公开了一种半抗原、其抗原、其相应的抗体及其在检测蒿甲醚中的应用。本发明提供的半抗原为式（Ⅱ）所示的化合物。本发明提供的化合物，可以作为半抗原，该半抗原与载体蛋白偶联后可以得到抗原，用抗原免疫动物，可以得到特异性针对蒿甲醚抗原的抗体。本发明还提供了所述化合物的制备方法，步骤简洁、成本低廉。用本发明方法制备的抗体的特异性好（与蒿甲醚结构类似物的交叉反应率低）、灵敏度高。本发明可用于蒿甲醚药物的大规模检测与质量控制，在蒿甲醚的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式（Ⅱ）。

公开(公告)号：CN103233021B

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201310133824.1

申请日：2013-04-17

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  曹振 ,  谭桂玉 ,  张亮 ,  张威 ,  郭素琴 ,  张瑞 ,  何丽珊

IPC分类号： C12N15/32 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/15 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12N15/70 ,  C07K14/325 ,  C07K19/00 ,  A01N57/16 ,  A01N63/02 ,  A61P7/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法。该方法涉及一种经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2的基因，具体如序列表中序列1所示。本发明所提供的苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：1）将含有序列1的第109-1269位或整个序列1所示DNA片段的重组载体导入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌；2）培养所述重组大肠杆菌，进行诱导表达，收集并裂解菌体，获得苏云金芽孢杆菌晶体融合蛋白Bt Cry35Ba2（序列2）。在大肠杆菌中，本发明所提供的经过密码子优化的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白Bt Cry35Ba2基因（N-Cry35Ba2基因）表达所得蛋白并未因密码子优化而影响其蛋白活性。

公开(公告)号：CN103760353A

公开(公告)日：2014-04-30

申请号：CN201410045470.X

申请日：2014-02-08

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  周立刚 ,  傅小香 ,  单体江 ,  王晓晗 ,  赖道万

IPC分类号： G01N33/577 ,  G01N33/531

摘要： 本发明公开了一种检测稻曲菌素A的方法及其专用酶联免疫试剂盒。本发明所提供的方法及其专用试剂盒所使用的抗稻曲菌素A的单克隆抗体是由小鼠杂交瘤细胞株2D3G5分泌产生的，该小鼠杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC？No.8774。本发明所提供的抗稻曲菌素A的单克隆抗体是以稻曲菌素A-OVA（稻曲菌素A和卵清白蛋白的偶联物）为包被抗原，通过间接竞争ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选得到的；利用该单克隆抗体制备得到的间接竞争酶联免疫试剂盒，用于定性或定量检测植物样品中的稻曲菌素A，线性检测范围在2.8-72.0ng/mL，具有快速、特异性强、灵敏度高的优点。

公开(公告)号：CN103159778A

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201310102015.4

申请日：2013-03-27

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  郭素琴 ,  崔永亮 ,  王敏 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  何丽珊 ,  张亮 ,  张瑞 ,  张威

IPC分类号： C07D493/20 ,  C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53 ,  G01N33/531 ,  G01N30/60

摘要： 本发明公开了一种半抗原、其抗原、其相应的抗体及其在检测蒿甲醚中的应用。本发明提供的半抗原为式（Ⅱ）所示的化合物。本发明提供的化合物，可以作为半抗原，该半抗原与载体蛋白偶联后可以得到抗原，用抗原免疫动物，可以得到特异性针对蒿甲醚抗原的抗体。本发明还提供了所述化合物的制备方法，步骤简洁、成本低廉。用本发明方法制备的抗体的特异性好（与蒿甲醚结构类似物的交叉反应率低）、灵敏度高。本发明可用于蒿甲醚药物的大规模检测与质量控制，在蒿甲醚的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式（Ⅱ）。

公开(公告)号：CN101445557B

公开(公告)日：2012-07-25

申请号：CN200810239765.5

申请日：2008-12-16

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  高巍 ,  南铁贵 ,  何素平 ,  赵洪伟 ,  刘威 ,  谭桂玉 ,  谭伟明 ,  李召虎

IPC分类号： C07K14/765 ,  C07K14/795 ,  C07K14/77 ,  C07K16/44 ,  G01N33/53

摘要： 本发明公开了一种镉离子抗原及其制备方法与应用。该镉离子抗原，是螯合剂与载体蛋白的偶联物与镉离子形成的络合物。该制备镉离子抗原的方法，包括如下步骤：(1)将螯合剂重氮化，得到重氮化的螯合剂；(2)将载体蛋白与所述重氮化的螯合剂混合，进行偶联反应，得到载体蛋白与重氮化的螯合剂的偶联物；(3)将镉离子与所述偶联物混合，进行络合反应，得到镉离子抗原。利用本发明的方法能方便快捷地获得镉离子抗原，成本低，效果好。用本发明方法制得的完全抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。因此，本发明方法及由该方法获得的抗原在镉离子的酶联免疫检测中会有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN101968481A

公开(公告)日：2011-02-09

申请号：CN201010253926.3

申请日：2010-08-13

申请人： 中国农业大学

发明人： 王保民 ,  赵洪伟 ,  南铁贵 ,  谭桂玉 ,  曹振 ,  高巍 ,  王敏 ,  孙硕 ,  李召虎

IPC分类号： G01N33/53 ,  G01N33/566 ,  C07K16/44 ,  C12N5/20 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种检测样品中是否含有重金属的方法及其专用试剂盒。该试剂盒，包括包被原、抗待检重金属的抗体；所述包被原与抗待检重金属的抗体相互作用，且所述包被原与所述抗待检重金属的抗体的亲和力小于所述待检重金属与所述抗待检重金属的抗体的亲和力。实验证明，本发明所提供的制备铜离子非均等竞争ELISA检测法中，包被抗原的制备方法简单，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的包被抗原对ELISA检测灵敏度有明显提高。本发明的制备包被抗原的方法及由该方法建立的铜离子快速免疫检测方法将有广阔的应用前景。