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公开(公告)号：CN101787389A
公开(公告)日：2010-07-28
申请号：CN200910217427.6
申请日：2009-12-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 预测乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法，它涉及一种利用预测微生物学原理预测金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法。本发明解决了现有检测乳中金黄色葡萄球菌菌数和金黄色葡萄球菌肠毒素的方法操作复杂、检测时间长的问题。方法：1.根据y＝7.1917×10-5×T2+0.022782×T-0.32889得到最大生长速率；2.根据log N(t)＝A+C[exp(-exp(-y(t-M)))]得到菌数；3.将菌数106.4cfu/mL所对应的时间t，结合F＝0.0018543×T2-0.050277×T+0.32629得到的产毒速率，即实现了金黄色葡萄球菌生长和产毒的预测。本发明方法操作简单、检测时间短。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101735994A
公开(公告)日：2010-06-16
申请号：CN200910217470.2
申请日：2009-12-31
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种在乳酸乳球菌中表达牛胰蛋白酶的方法，它涉及一种表达牛胰蛋白酶的方法。解决了现有牛胰蛋白酶目前还不能在乳酸乳球菌中表达的问题。方法：将野生型牛胰蛋白酶N端的8个密码子和所有编码Leu和Ary的稀有密码子替换为乳酸乳球菌的偏爱密码子，得人工合成牛胰蛋白酶基因，并引入识别序列，然后与pUC57连接转化DH5α，筛选阳性转化子pUC57-trym，再与表达载体pSEC-E7同时双酶切后，回收所需目的片段，连接并构建重组表达载体pSEC-trym，电转化转入乳酸乳球菌NZ9000，厌氧培养后经乳链菌肽Nisin诱导，即完成。本发明使人工合成牛胰蛋白酶成功地在乳酸乳球菌中进行表达，且具有生物学活性。
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公开(公告)号：CN101168776A
公开(公告)日：2008-04-30
申请号：CN200710144570.8
申请日：2007-11-07
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种利用实时荧光反转录PCR分析原核生物基因表达的相对定量方法，它属于基础生物学及医学领域。本发明解决了DNA残留，及菌体生长过程中管家基因表达不稳定和当PCR效率不高或多种基因间PCR效率差别较大时，所分析出的结果误差较大，致使现有基因表达相对定量在实际应用中具有一定局限性的问题。本发明的分析方法是将RNA提取物中的并存DNA作为内标，制备RT、RT－样品，通过相对定量公式计算出原核生物基因表达量，其中Q表示目的基因的表达量，Q′表示参照基因的表达量，ΔCt＝CtRT－CtRT－，ΔCt′＝ CtRT′－CtRT－′，E＝10[－1/slope]－1，Ct值是指荧光信号达到阈值时的循环数，RT表示反转录，RT－表示非反转录。本发明具有过程简单、易操作、一次性可进行大量样品检测、结果直观、敏感性高、特异性强、重复性好等优点。
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公开(公告)号：CN100577817C
公开(公告)日：2010-01-06
申请号：CN200710144570.8
申请日：2007-11-07
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种利用实时荧光反转录PCR分析原核生物基因表达的相对定量方法，它属于基础生物学及医学领域。本发明解决了DNA残留，及菌体生长过程中管家基因表达不稳定和当PCR效率不高或多种基因间PCR效率差别较大时，所分析出的结果误差较大，致使现有基因表达相对定量在实际应用中具有一定局限性的问题。本发明的分析方法是将RNA提取物中的并存DNA作为内标，制备RT、RT-样品，通过相对定量公式计算出原核生物基因表达量，其中Q表示目的基因的表达量，Q'表示参照基因的表达量，，，，Ct值是指荧光信号达到阈值时的循环数，RT表示反转录，RT-表示非反转录。本发明具有过程简单、易操作、一次性可进行大量样品检测、结果直观、敏感性高、特异性强、重复性好等优点。
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公开(公告)号：CN101386884B
公开(公告)日：2011-07-27
申请号：CN200810137442.5
申请日：2008-10-31
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。
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公开(公告)号：CN101386884A
公开(公告)日：2009-03-18
申请号：CN200810137442.5
申请日：2008-10-31
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法及检测试剂盒，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法及检测试剂盒。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。
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