公开(公告)号：CN101735994A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200910217470.2

申请日：2009-12-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  姚丽燕 ,  曲行光 ,  韩希妍 ,  张光辉 ,  赵凤 ,  周艳秋

IPC: C12N9/76 ,  C12N15/57 ,  C12N15/74

Abstract: 一种在乳酸乳球菌中表达牛胰蛋白酶的方法，它涉及一种表达牛胰蛋白酶的方法。解决了现有牛胰蛋白酶目前还不能在乳酸乳球菌中表达的问题。方法：将野生型牛胰蛋白酶N端的8个密码子和所有编码Leu和Ary的稀有密码子替换为乳酸乳球菌的偏爱密码子，得人工合成牛胰蛋白酶基因，并引入识别序列，然后与pUC57连接转化DH5α，筛选阳性转化子pUC57-trym，再与表达载体pSEC-E7同时双酶切后，回收所需目的片段，连接并构建重组表达载体pSEC-trym，电转化转入乳酸乳球菌NZ9000，厌氧培养后经乳链菌肽Nisin诱导，即完成。本发明使人工合成牛胰蛋白酶成功地在乳酸乳球菌中进行表达，且具有生物学活性。

公开(公告)号：CN101386884B

公开(公告)日：2011-07-27

申请号：CN200810137442.5

申请日：2008-10-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  满朝新 ,  赵宁 ,  吕琦 ,  赵凤 ,  刘伟 ,  韩希妍 ,  毕宇涵 ,  王明娜 ,  张光辉 ,  相丽 ,  闫冰

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。

公开(公告)号：CN101914627A

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN201010267606.3

申请日：2010-08-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  吕学娜 ,  王明娜 ,  韩琳琳 ,  张光辉 ,  满朝新 ,  刘颖 ,  曲行光

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/53

Abstract: 一种评价嗜酸乳杆菌免疫调节作用的方法，涉及一种评价免疫调节作用的方法。方法：一、将待评价的嗜酸乳杆菌培养到对数生长后期，制得菌悬液；二、将极化状态的人结肠腺癌细胞Caco-2与菌悬液共同孵育；三、采用Trizol法抽提孵育后的人结肠腺癌细胞Caco-2的总RNA，再提取蛋白质；四、利用Real Time RT-PCR法和Western blot法对免疫调节相关基因的表达情况分别在总RNA和蛋白质水平进行检测和比对即可。本发明通过对免疫调节相关基因的检测，可以更加客观的评价嗜酸乳杆菌对宿主可能产生的不良炎症反应等，以排除其潜在的致病危险。

公开(公告)号：CN101386884A

公开(公告)日：2009-03-18

申请号：CN200810137442.5

申请日：2008-10-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  吕琦 ,  赵凤 ,  刘伟 ,  韩希妍 ,  毕宇涵 ,  王明娜 ,  张光辉 ,  相丽 ,  闫冰

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 一种同时检测原料乳中多种致病菌的方法及检测试剂盒，它涉及了一种检测原料乳中细菌的方法及检测试剂盒。本发明解决了现有检测原料乳中致病菌的方法中存在不能同时检测多种致病菌、耗时长、费用高或不适用于检测牛乳的问题。本发明同时检测原料乳中多种致病菌的方法按照如下步骤进行：一、将待检测的原料乳去除脂肪；二、将步骤一保温后的样品过滤；三、收集洗脱液；四、进行多重PCR并对凝胶成像系统进行分析；即得到检测结果。本发明的试剂盒由Taq酶溶液、多重PCR反应液、阴性对照液和阳性对照液组成。本发明的方法具有耗时短、费用低、适用于检测牛乳和检测结果准确的优点。本发明的试剂盒使用方便。